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甜菜是重要的经济作物,蔗糖合成效率的高低是评判甜菜品种好坏的标准之一,因此,研究与蔗糖合成相关的酶也是非常必要的。蔗糖磷酸合酶(SPS)是植物蔗糖合成的关键酶,它在调控光合产物的最终分配、促进库细胞中蔗糖的积累方面具有重要的作用。本研究从以下几方面开展对蔗糖磷酸合酶基因的研究。
1. RT-PCR克隆得到甜菜蔗糖磷酸合酶基因(BvSPS1)的克隆,对该基因的序列分析表明:BvSPS1开放阅读框全长3138 bp,编码1045个氨基酸,所推导的蛋白质分子量为118 kDa,所推测的BvSPS1氨基酸序列跨膜区域位于第561-593位氨基酸之间。与酿酒葡萄(Vitis vinifera)的序列同源性是75.45%、烟草(Nicotiana tabacum)为74.59%。
2. 利用半定量RT-PCR分析了BvSPS1基因在甜菜中的表达,结果显示,该基因在根部的表达水平远远高于叶柄及叶,表达方式属于组织特异性表达。对甜菜各部位的SPS酶活性分析同样表明该酶在根部的活性高于其它部位。葡萄糖及蔗糖对BvSPS1基因的表达产生不同的影响,葡萄糖能够强化BvSPS1基因的表达,且表达量与处理时间相关。
3. 建立了甜菜的遗传转化体系,研究结果表明叶柄的再生能力较强,甜菜叶柄在6-BA 1.0 mg/L与IAA 0.3 mg/L激素组合的培养基上,再生率较高,均提高至约14.0%。利用农杆菌介导方法将BvSPS1基因导入甜菜,并获得了转基因植株,PCR结果为阳性。
本研究得出的结论从分子水平初步阐述了BvSPS1基因的特性和功能,同时通过将该基因导入甜菜获得转基因甜菜,为进一步研究该基因功能奠定基础。