为了研究猪瘟病毒对猪血管内皮细胞的特异亲嗜性造成血管破裂、出血的发病机理，我们分别用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化猪血管内皮细胞，成功地分离培养了猪血管内皮细胞。通过原代培养、传代培养、纯化及生长曲线等的研究，了解了猪血管内皮细胞在体外培养过程中的生长特性；并通过剂量-反应关系研究了胰岛素对血管内皮细胞生长增殖的促进作用。结果表明：1．用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离均可获得接种量的原代培养物，但用Ⅰ型胶原酶消化能较好的分离猪血管内皮细胞，对细胞的损伤小，获得的细胞培养时贴壁率高。接种后培养24小时，细胞呈萌芽形式生长，形成许多小岛状的细胞集落，48小时细胞集落增大，可区分出细胞密集的中央区及细胞密度较小的周边区。原代细胞6～7天可汇合形成单层。2．对于30～40日龄仔猪的血管段用0.1％Ⅰ型胶原酶消化10分钟，获得的内皮细胞最多，超过10分钟，混入的成纤维细胞明显增加。3．与0.25％的胰蛋白酶相比，用ATV使用液结合吸管吹打更适合于猪血管内皮细胞消化传代。4．根据成纤维细胞较内皮细胞对柠檬酸胰蛋白酶更敏感，可用0.25％柠檬酸胰蛋白酶清除内皮细胞中有时混杂的成纤维细胞，混合物用柠檬酸胰蛋白酶消化，并在倒置显微镜下观察，当有20％～40％细胞脱落时立即终止消化，收集的细胞主要为成纤维细胞，未脱壁的细胞主要为内皮细胞，继续培养后重复此过程1～2次可获得纯度很高的内皮细胞。5．培养细胞在相差显微镜下观察，呈典型的“铺路石”状排列，细胞间存在接触抑制；在扫描电镜下观察，细胞多角形或形状不规则，胞浆中伸出许多细长突起，细胞表面有许多圆形小凹窝；第Ⅷ因子相关抗原抗体间接免疫荧光染色，可检测到细胞核周围的胞质呈明显的黄绿色荧光。以上几点可证明培养的细胞为内皮细胞。 6．与MEM相比，M-199更适合于用作培养猪血管内皮细胞的基础培养基。7．生长液中加入胰岛素和氢化可的松，可明显促进细胞的生长和增殖，剂量-反应曲 猪血管内皮细胞体外培养方法的建立及生长特性研究 线表明胰岛素的最适用量为8卜g／InL。8．从生长曲线可以看出，传代猪血管内皮细胞接种后有1天左右的滞留期，然后细 胞进入对数生长期，可持续2～3天，第5天进入平台期，第8天细胞开始脱落死 亡。