[目的]研究MicroRNA200a(miR-200a)对TGF-β诱导人肝星状细胞(LX-2)活化与增殖的作用,探讨miR-200a抑制TGF-β改善血吸虫病肝纤维化的机制。[方法]细胞实验选用LX-2,将细胞培养至对数生长期,采用不同浓度(0、5、10、15ng/mL)的TGF-β1在不同时间点(0、24、48、72小时)刺激LX-2,用试剂盒提取细胞总RNA及蛋白,荧光定量PCR方法检测LX-2中miR-200a、α-SMA、Colla I、TGF-β2的mRNA;western-blot方法检测LX-2中TGF-β2的蛋白表达;MTT法检测细胞增殖率。用上述实验中获得的TGF-β1最佳刺激浓度5ng/mL及最佳刺激时间48小时进行后续实验。构建miR-200a mimics相关质粒,利用瞬时转染技术,分别将各质粒转染至LX-2细胞中,细胞实验分组为:PBS组、TGF-β1组、miR-200a mimics组、miR-200a mimics NC组、miR-200a inhibitor组及miR-200a inhibitor NC组共六组,孵育6小时后,除PBS组外,其它各组加入TGF-β1作用48小时,用试剂盒提取细胞总RNA及蛋白,采用荧光定量PCR方法检测LX-2中miR-200a、α-SMA、Colla I、TGF-β2的mRNA;western-blot方法检测LX-2中TGF-β2的蛋白表达;MTT法检测细胞增殖率。动物实验选用64只6-8周龄Balb/c雌性小鼠,随机分为四组,每组16只小鼠,分别为:正常对照组为未感染血吸虫组,其它三组均通过尾蚴腹部敷贴法感染血吸虫(每只小鼠感染16±2条尾蚴)为感染组。它们分别为:PBS组(血吸虫病模型组);Lenti-NC组(慢病毒阴性对照组);Lenti-miR-200a组(慢病毒实验组)。各组小鼠经尾静脉分别注射等体积60uL生理盐水、PBS、Lenti-NC(1×10~9TU/mL)和Lenti-miR-200a(1×10~9TU/mL),常规喂养小鼠,在感染后第4w、6w、8w和10w的四个时间点,随机在各组中取4只小鼠麻醉后摘眼球取血,脱颈处死,摘取肝脏组织。采用荧光定量PCR分别检测各组小鼠在不同感染时间点肝组织中miR-200a、α-SMA、Colla I、TGF-β2的mRNA的表达水平;采用ELISA法检测小鼠血清中ALT表达水平;采用HE和Masson染色观察小鼠肝组织病理变化。[结果]细胞实验结果显示:(1)不同浓度(0、5、10、15ng/mL)TGF-β1刺激LX-2,miR-200a的表达呈剂量依赖性下降,且在5ng/mL时下降最明显,LX-2的增殖率、LX-2中的TGF-β2 mRNA与蛋白表达水平以及纤维化因子α-SMA、Colla I的mRNA表达水平,随着TGF-β1浓度的增加逐渐升高。(2)以5ng/mLTGF-β1最佳浓度刺激LX-2,miR-200a的表达呈时间依赖性下降,且0∽48小时下降明显,48∽72小时无显著性差异,以48小时为最佳刺激时间。(3)miR-200a mimics转染至LX-2细胞后,LX-2中miR-200a的表达量显著性升高,而α-SMA、Colla I、TGF-β2的mRNA表达水平均显著性下降,LX-2的增殖率显著性下降,与其他各组相比有统计学意义(P<0.05)。动物实验结果显示:(1)肝组织miR-200a水平:PBS组(血吸虫病模型组)和Lenti-NC组(慢病毒阴性对照组)随着感染时间的延长肝组织中miR-200a的表达量逐渐下调,与正常对照组(未感染血吸虫组)比较具有显著性差异(P<0.05);而Lenti-miR-200a组(慢病毒实验组)小鼠肝组织中miR-200a的表达量显著性增高。(2)肝组织纤维化指标变化:PBS组和Lenti-NC组的α-SMA及TGF-β2的mRNA表达水平随着感染时间的延长,而逐渐升高,CollaI的表达水平在感染第6w时达峰值;而Lenti-miR-200a组的α-SMA、CollaI、TGF-β2的mRNA表达水平明显低于PBS组和Lenti-NC组(P<0.05)。(3)血清ALT水平:PBS组和Lenti-NC组在感染第4w时开始升高,第6w时达到峰值;而Lenti-miR-200a组在感染后第4w和第6w显著低于PBS组和Lenti-NC组(P<0.05)。(4)肝组织HE和Masson染色:从感染第6w开始,PBS组和Lenti-NC组小鼠肝组织内出现不同程度炎症细胞及蓝色胶原纤维,以及到第8w时更为明显,且随着感染时间延长而情况加重,而Lenti-miR-200a组病变程度改变均明显减轻。[结论]miR-200a可通过下调TGF-β2部分抑制TGF-β诱导的血吸虫病肝纤维化。