长链非编码RNA 91H在结直肠癌中的表达及其功能研究

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目的:近年大量的研究数据表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在恶性肿瘤的发生发展的过程中扮演了至关重要的作用。现有证据表明lnc RNA91H在乳腺癌组织中高表达,并且反式调控IGF2的表达。本研究拟通过检测91H在结直肠癌中的表达,探讨lnc RNA 91H的表达与结直肠癌的临床相关性及其生物学功能,初步揭示91H在结直肠癌中的作用及相关的分子机制,为日后临床分子靶向治疗结直肠癌提供理论依据。方法:1.先后收集72例结直肠癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,购买结直肠癌细胞系HCT-8、HT-29、HCT-116、SW-620以及正常肠黏膜上皮细胞FHC;2.采用聚合酶链反应技术(PCR)检测结直肠癌组织样本的微卫星不稳定性;3.运用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对组织样本(结直肠癌组织和癌旁组织)和四种结直肠癌细胞系及其正常细胞FHC的91H表达量进行检测,筛选出表达最高的结直肠癌细胞株用于后续实验,同时也检测了组织样本的拷贝数变异,分析91H表达量与其拷贝数变异及临床特征的相关性;4.构建91H干扰片段,利用Lip2000脂质体瞬时转染91H表达量最高的结直肠癌细胞株,并利用RT-q PCR检测其转染效率;5.运用MTT、流式细胞术、划痕、Transwell等实验观察91H对转染后细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响。结果:1.91H在结直肠癌组织中的相对表达水平是癌旁组织的6.10±3.12倍,差异有统计学意义(P<0.05)。2.患者的临床病理资料统计分析结果显示:91H的高表达与肿瘤的远处转移密切相关(P=0.027);生存分析结果表明:在癌组织中91H高表达的结直肠癌患者的总生存率较低表达的患者明显降低(P<0.001);多因素回归分析表明91H高表达是影响结直肠癌患者预后的一个独立风险因子(HR=3.66,95%CI=1.66-8.10,P=0.001)。3.91H在结直肠癌及其癌旁组织的表达水平与其拷贝数变异无明显相关性(P>0.05)。4.与正常肠黏膜上皮细胞FHC相比,91H在HCT-8、HT-29、HCT-116细胞中表达水平明显升高(P<0.05),并且在HCT-116细胞株中91H的表达水平最高,而在SW-620细胞中无显著差异(P>0.05)。5.体外实验结果表明:干扰91H的表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,但对细胞的凋亡无明显影响。结论:1.91H高表达与肿瘤的转移及不良预后密切相关,可作为一个新的临床肿瘤标志物用于结直肠癌患者的预后判断。2.91H高表达能促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
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