目的:对狭叶柴胡内生真菌CHS5抗肝癌活性成分进行提取分离,检测各提取分离部分的抗肝癌活性及可能的作用机制。方法:(1)对狭叶柴胡内生真菌CHS5进行提取分离,得到石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁竖部分和水部分,利用MTT方法检测各提取分离部分抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,并根据MTT结果确定后续实验的给药浓度。(2)用狭叶柴胡内生真菌CHS5石油醚部分和乙酸乙酯部分处理后,分别在光学显微镜下和荧光显微镜下观察细胞形态及细胞核形态变化及染色情况。Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western Blot检测凋亡相关蛋由及NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。(3)Transwell实验检测处理后细胞的侵袭和迁移情况,ELISA检测细胞外分泌血管生成相关蛋白的表达情况。结果:狭叶柴胡内生真菌CHS5石油醚部分和乙酸乙酯部分对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用呈现出一定的时间及浓度依赖关系,石油醚部分对肝癌细胞HepG2作用24 h和48 h的IC50值分别为32.85 μg/mL和28.49 μg/mL,乙酸乙酯部分对肝癌细胞HepG2作用24 h和48 h的IC50值分别为56.70 μg/mL和55.07 μg/mL。形态观察及凋亡率实验表明其具有促凋亡活性,且其促凋亡活性与浓度成正相关。Western Blot结果表明其可下调Caspase 3、Caspase 9及Bcl-2的表达,上调Cleaved PARP和Bax蛋白的表达,说明其可通过线粒体途径调控细胞凋亡。但是NF-κB、κB-α及IKK-β的表达均下调说明其调控凋亡并不是通过NF-κB信号通路。Transwell实验结果表明其具有抑制肝癌细胞HepG2侵袭和迁移能力,且抑制作用与浓度成正相关。ELISA结果表明其可抑制肝癌细胞HepG2血管生成相关蛋白的表达。结论:实验结果表明,狭叶柴胡内生真菌CHS5石油醚部分和乙酸乙酯部分能有效抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其抗肝癌的作用是通过促进细胞凋亡及抑制侵袭转移实现的。