基于分子印迹技术与表面增强拉曼散射的硼亲和夹心分析方法的研究

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糖蛋白在生物体中扮演着非常重要的角色,影响包括分子识别、免疫应答等诸多重要的生命进程。同时,糖蛋白的异常表达与疾病的发生有着密切的关系,因此许多糖蛋白被用作疾病标志物在临床诊断中使用。由于许多目标糖蛋白在生物样品中的丰度很低,而且又存在着高丰度干扰物的影响,因此对于实际样品中糖蛋白的检测就需要特异性非常好的富集手段与高灵敏的检测工具。在现有检测糖蛋白的方法中,免疫分析是最常用的方法之一,已被广泛用于临床检测中。免疫分析是基于抗原抗体的高专一性作用,结合了诸如放射性标记,酶催化,荧光,化学发光等的检测方法。虽然免疫分析已经被广泛使用,但仍存在许多问题。免疫亲和使用的抗体难以保存,容易失活,同时制备困难,费用高。而传统免疫分析的检测手段,虽然灵敏度高,但是也存在着一些缺陷,如放射性同位素的使用会影响人体的健康,酶在实验过程中容易失活,而荧光和化学发光也易受环境影响而干扰检测。本文根据糖蛋白的特点,发展出一种基于硼亲和分子印迹技术和表面增强拉曼散射(SERS)的硼亲和夹心法。我们合成了基于硼亲和作用的新型SERS探针,与传统的SERS探针相比,新型硼亲和功能化的SERS探针制备方法简单,便捷。我们使用硼亲和分子印迹多孔整体阵列作为拉曼基底。利用硼亲和分子印迹阵列抓取样品中的目标分子,清洗掉非特异吸附后,用硼亲和SERS探针标记被抓取到的目标分子,清洗掉多余的标记探针后,进行拉曼检测。最后我们利用硼亲和夹心法有效地测定实际样品血清中甲胎蛋白的含量。本方法克服了传统免疫分析的不足,使用硼亲和分子印迹材料作为抗体的替代品,不但很好地保留了类似于抗体的专一性与结合力,同时又比抗体稳定,廉价。利用表面增强拉曼散射光谱检测,它与传统检测方法相比具有许多明显的优势:超高的灵敏度,不易受环境影响,检测快速,随着便携式拉曼光谱仪的使用更可以进行现场检测。本方法可适用于癌症的早期筛查以及疾病的快速诊断中,具有非常广阔的应用前景!
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