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1目的观察补肾安胎冲剂对复发性流产小鼠胚胎丢失率及胎盘微血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞中VEGF、VEGFR2蛋白表达的影响,进而从分子及细胞水平探讨补肾安胎冲剂保胎的作用机理,为临床上运用补肾安胎冲剂治疗RSA提供新的理论依据。2方法将健康雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠以2∶1合笼交配建立RSA小鼠模型。将健康雌性CBA/J小鼠与雄性Balb/c小鼠以2∶1合笼交配建立正常妊娠小鼠模型。每日凌晨5:00-6:00检查雌鼠阴道,若见阴栓,则造模成功,记为妊娠第1天;若未见阴栓,则继续合笼。共造复发性流产模型小鼠50只,正常妊娠小鼠10只。将造模成功的RSA小鼠随机分为5组:模型组、黄体酮组、中药高、中、低剂量组,每组入组小鼠10只。从妊娠第1天开始给药正常妊娠组、模型组给予蒸馏水灌胃;黄体酮组予黄体酮胶囊26mg/kg/d给药;BSAT高、中、低剂量组分别予35.1g/kg/d、11.7g/kg/d和3.9g/kg/d蒸馏水稀释灌胃,每日16:00-17:00给药,连续15天。末次给药24h后,处死小鼠,分离出各组小鼠完整的子宫,在体式显微镜下提取并原代培养胎盘微血管内皮细胞、血管平滑肌细胞及成纤维细胞,肉眼观察每组小鼠胚胎丢失情况并记录。用Western blot、免疫荧光法检测妊娠小鼠胎盘微血管细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞中VEGF、VEGFR2蛋白表达水平。3结果3.1胚胎丢失率:与正常组比较,模型组RSA流产小鼠流产率显著提高(P<0.01)。与模型组比较,西药组、补肾安胎冲剂中剂量、补肾安胎冲剂高剂量组RSA流产小鼠流产率降低显著,差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.2 Western Blot法检测各组孕鼠胎盘微血管内皮细胞中,与正常组相比,复发性流产模型组妊娠小鼠VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,西药组、补肾安胎冲剂低、中、高剂量VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,补肾安胎冲剂中、低剂量组的VEGF、VEGFR2及西药组VEGF蛋白表达含量显著下降(P<0.01),西药组VEGFR2蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.3 Western Blot法检测各组孕鼠胎盘平滑肌细胞中,与正常组相比,复发性流产模型组妊娠小鼠VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,西药组、补肾安胎冲剂低、中、高剂量VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,补肾安胎冲剂中、低剂量组VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01);西药组VEGF、VEGFR2蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.4 Western Blot法检测各组孕鼠胎盘成纤维细胞中,与正常组相比,复发性流产模型组妊娠小鼠VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,西药组、补肾安胎冲剂低、中、高剂量VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,补肾安胎冲剂中、低剂量组VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01);西药组VEGF、VEGFR2蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.5免疫荧光法检测各组孕鼠胎盘微血管内皮细胞中,与正常组相比,复发性流产模型组妊娠小鼠VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,西药组、补肾安胎冲剂低、中、高剂量VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,补肾安胎冲剂中、低剂量组的VEGF、VEGFR2及西药组VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01),西药组VEGF蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.6免疫荧光法检测各组孕鼠胎盘平滑肌细胞中,与正常组相比,复发性流产模型组妊娠小鼠VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,西药组、补肾安胎冲剂低、中、高剂量VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,补肾安胎冲剂中、低剂量组的VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01),西药组VEGF、VEGFR2蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.7免疫荧光法检测各组孕鼠胎盘成纤维细胞中,与正常组相比,复发性流产模型组妊娠小鼠VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,西药组、补肾安胎冲剂低、中、高剂量VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,补肾安胎冲剂中、低剂量组的VEGF、VEGFR2蛋白表达含量显著下降(P<0.01),西药组VEGF、VEGFR2蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。4结论补肾安胎冲剂通过上调微血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞中VEGF、VEGFR2蛋白表达,活化VEGF/VEGFR2信号通路,促进了血管的新生,增加毛细血管数量,改善母胎界面血管的形成,创建了良好的血管网络环境,为胚胎的发育提供充足的营养,从而降低胚胎的丢失率。