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目的:探讨外源性CYR61在人外周血单个核细胞(PBMC)中表达后诱导其配体-整合素表达上调的生物学特性,为研究CYR61在炎症、类风湿关节炎和其他自身免疫病中的作用提供新思路。
方法:构建人源、全长CYR61真核重组表达质粒pcDNA-CYR61-Fc,经DNA测序确认其序列正确后,将该质粒转染COS7细胞并用蛋白免疫印迹试验检测其蛋白的表达。然后,用脂质体法转染人PBMC,用实时定量PCR法检测CYR61表达量和相关整合素的表达格局。
结果:测序显示所构建的CYR61重组表达质粒序列正确。将该质粒转染COS7细胞后,免疫印迹试验表明,转染的细胞胞浆和营养液上清中都含有CYR61-Fc融合蛋白,提示含全长CYR61与人源IgG Fc段融合蛋白能够分泌到胞外。将该质粒转染人PBMC,经PHA刺激后,外源性 CYR61迅速表达,24小时后表达量达到高峰,然后迅速下降,48小时后基本回落。与此同时,整合素分子av、aM、b3及b5表达明显上调,尤以b5最为显著。
结论:本研究已经成功构建了pcDNA-CYR61-Fc真核表达质粒,该质粒能有效地表达和分泌CYR61-Fc融合蛋白。表达的融合蛋白通过自分泌或旁分泌途径上调PBMC整合素分子的表达。