抗菌肽Pexiganan和IB-367基因在大肠杆菌中的克隆与表达

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抗菌肽是生物体产生的一种具有强抗菌作用的阳离子多肽,是生物先天免疫的重要组成部分,是机体理想的第一道防线。抗菌肽具有分子量小、合成速度快、扩散迅速、强碱性、热稳定性高、水溶性好、抗菌机理独特等特性。抗菌肽具有广谱抗菌能力的同时,甚至对病毒及肿瘤细胞也能发挥杀灭作用,更重要的是抗菌肽对高等动物正常细胞无明显的毒害作用。传统抗生素耐药菌株种类不断增多,全球抗生素的滥用加速了这一过程,抗菌肽的开发将为解决这一棘手难题提供更多的途径。抗菌肽所具备的药用价值使其被开发成为新一类抗感染药物成为可能。本课题通过人工合成两种抗菌肽Pexiganan和IB-367的基因,构建了表达载体并筛选了两株表达抗菌肽的工程菌株,在大肠杆菌中分别表达了Pexiganan和IB-367与GST的融合蛋白,摸索出了融合蛋白以可溶形式大量存在于上清中的最佳诱导条件,并通过亲和层析对表达载上清中的融合蛋白进行纯化,纯化后的产物经过Factor Xa切割得到两种目的小肽——Pexiganan和IB-367。抑菌活性检测证明Pexiganan和IB-367对金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌均有抑制作用。
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