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目的：探讨联合应用牙囊细胞(rDFCs)膜片与骨髓间充质干细胞(rBMSCs)三维共培养促进牙周组织缺损重建的可行性。方法：1.rDFCs、rBMSCs的体外分离、培养和鉴定。2.rDFC s膜片的构建和检测。将第3代rDFC接种到温度敏感培养皿中,用含有80μg/ml抗坏血酸成膜诱导液连续诱导2周,检测细胞膜片生物学活性。行HE染色鉴定。3.rBMSCs复合nHA-PLGA支架材料三维聚合体的构建与检测。取生长良好的第3代rBMSCs按5*105密度接种于nHA-PLGA支架材料,静置培养6天。扫面电镜观察细胞在支架上的黏附生长情况。4.rDFCs膜片包裹“rBMSCs-nHA-PLGA支架材料三维聚合体”进行体内移植。通过rDFC细胞膜片包裹已接种有rBMSCs的nHA-PLGA支架材料组成的细胞-支架三维聚合体,并将其贴合固定于预制牙本质片后植入裸鼠皮下,研究组织再生情况。实验分组：1.牙本质片+nHA-PLGA;2.牙本质片+nHA-PLGA-rBMSCs聚合体；3.牙本质片+nHA-PLGA-rBMSCs聚合体+rDFC细胞膜片。于第8周处死实验对象,收集标本,分别进行HE和MASSON染色。结果：1.成功分离培养大鼠DFCs、BMSCs,并鉴定。2.rDFCs细胞膜片HE染色结果显示rDFC细胞膜片具有一定的厚度,细胞层数为2-5层,细胞基质分泌丰富。3.rBMSCs接种nHA-PLGA支架材料电镜扫描结果显示rBMSCs能黏附于HA-PLGA支架材料生长,且生长状态良好。4. rDFCs细胞膜片复合nHA-PLGA支架材料与骨髓间充质干细胞三维聚合体裸鼠皮下移植收集标本,HE及Masson染色结果显示：组3中牙本质片与支架材料间有一细胞条带,有似牙周膜的纤维样组织生成,支架材料侧有类骨组织及新鲜血管形成。组2中牙本质片与支架材料间亦有少量纤维样组织生成,支架材料有吸收,无骨样组织形成。组1中则未见纤维样组织生成。结论：rDFCs膜片与接种rBMSCs的nHA-PLGA三维支架复合,形成双细胞三维共聚体,植入裸鼠皮下,实验结果显示新生组织有类似牙周膜样的纤维组织、骨样组织及新的血管形成,这提示rDFCs与rBMSCs作为种子细胞联合应用,进行三维共培养,可有效增强牙周组织再生能力,为牙周组织再生提供了新的思路。