[背景和目的]结直肠癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤,目前缺乏有效、特异的结直肠癌分子诊治疗靶标,从而严重限制了临床上结直肠癌综合治疗效果的提高。为了筛选高灵敏度、高特异性的有助于结直肠癌早期诊断及预后判断的特征分子群,明确结直肠癌发生发展过程中分子群变化的时空规律,建立结直肠癌分子分型的模式,本研究组在前期工作利用高通量芯片技术及组学技术在转录、转录后及翻译水平筛选出了不同临床分期结直肠癌差异表达的分子群；比对各层面的差异分子群及各分子在不同临床分期结直肠癌中的表达模式,我们发现ANXA4、CA1及ANXA1在转录、转录后及翻译水平的表达模式基本一致,提示这三个分子在结直肠癌的发生发展中可能发挥着重要作用,这一结果引起我们的关注。本研究将在蛋白及转录水平扩大样本量探究者三个分子在不同临床分期结直肠癌组织中的表达情况,并分析其与临床预后的相关性,明确这些分子在结直肠癌中的功能及表达规律,为结直肠癌的早期诊断及预后判断提供实验依据。[方法]收集结直肠癌标本建立临床资料库,采用Western blot在蛋白质水平分析ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期、不同分化程度的结直肠癌组织中的表达模式。在转录水平利用荧光实时定量PCR检测目的基因在相应结直肠癌组织中的表达水平。采用Kaplan-Meier生存曲线结合LOOCV判别函数分析各分子与预后的相关性。[结果](1)在蛋白水平,ANXA1在四期结直肠癌组织中均较正常组织中表达上调,上调率分别为：88.9%,22.22%,55.56%和62.50%。与自身正常对照比较,ANXA1在Ⅰ期表达水平明显上调(P=0.037),比较不同分期癌组织间的差异,发现Ⅰ期上调水平最明显,其动态表达趋势与前期实验结果基本相符。ANXA1在低分化腺癌与高分化腺癌中的表达水平明显高于正常组织及中分化腺癌中的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05),但高与低分化癌组织之间表达水平比较不具有统计学意义(P>0.05)；与正常结直肠组织比较,ANXA4在不同分期的结直肠癌组织中表达上调,上调率分别为：85.71%,57.14%,71.43%和88.33%,Ⅰ期、Ⅳ期与正常对照比较差异具有统计学意义(P<0.05)。但以Ⅳ期上调明显。此结果与前期实验结果相吻合。ANXA4在高中低不同分化程度中表达水平依次降低,但仅低分化腺癌与高分化腺癌表达量之间的差异存在统计学意义(P=0.047)；在蛋白水平,CA1在各期结直肠癌组织中表达明显下调,在Ⅰ期、Ⅱ期中下调率均为83.33%,在Ⅲ期、Ⅳ期癌组织中下调率均达到了100%。其表达水平在Ⅲ、Ⅳ期中下调的幅度明显大于Ⅰ期、Ⅱ期,两者之间存在统计学差异(P<0.05)。下调的趋势与前期实验基本相符。CA1在高分化腺癌到低分化腺癌组织中,其表达水平依次降低,低分化腺癌中CA1的表达水平明显低于高分化腺癌、中分化腺癌中的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)在mRNA水平,与蛋白质水平相同,ANXA1在四期结直肠癌组织中均表现为上调,而ANXA4在Ⅰ期、Ⅲ期、Ⅳ期结直肠癌组织中表达上调,其中Ⅳ期上调水平具有统计学意义(P=0.007),而Ⅱ期中,ANXA4表达水平略微下调,但与其正常对照相比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。CA1在四期结直肠癌组织中表达均下调(P<0.05)。且ANXA4、CA1的动态表达模式与蛋白水平的动态表达模式相符,ANXA1在mRNA水平的动态表达模式与蛋白质水平不完全相符。(3)生存分析结果示：经Kaplan-Meier生存曲线分析,CA1与预后相关,log-rank检验P=0.029；而ANXA1、ANXA4与预后关系不密切,P值分别为0.532及0.638[结论]1、ANXA1在Ⅰ期癌组织中表达明显升高,提示其可能为癌变发生时出现表达变化的早期分子；ANXA4在Ⅳ期癌组织中表达明显上调,提示其可能与肿瘤的侵袭转移能力相关；CA1与肿瘤的分期及分化程度均有密切关系。2、ANXA1、ANXA4、CA1在不同临床分期的癌组织中均呈动态表达；ANXA4、CA1在蛋白水平与mRNA水平的动态表达模式相一致。说明2D-DIGE结合质谱分析方法在筛选差异蛋白方面的应用上结果稳定、可靠。3、CA1与结直肠癌患者的预后密切相关；ANXA1、ANXA4与结直肠癌患者的预后无明显相关性；ANXA1、ANXA4、CA1构建的判别函数能对结直肠癌患者的OS状态及EFS状态做出很好的判别,且对EFS状态的判别准确性更高。