研究目的：“瘀热”是多种内科难治病的主要病因之一,近年来,“瘀热”学说已被列为国家重点基础研究发展计划--973计划,并进行了系统的临床研究。周仲瑛提出了瘀热阻窍是脑出血中风急性期的核心病机,凉血通瘀法是脑出血中风急性期的主要治疗大法,该法具有清热、凉血止血、活血祛瘀、通腑泻热等诸多作用。本课题从“瘀热”学说辨治内科难治病的规律及其证候本质的分子基础研究,以急性出血性中风患者为研究对象,采用理论、临床、实验相结合的研究方法,以揭示“瘀热”病因在急性出血性中风中的致病机制及“瘀热”学说的“热象”本质,由此扩大瘀热学说在内科难治病辨治中的应用,并从临床病患血样的指标检测来评价凉血通瘀方对脑出血急性期中风患者的确切疗效。研究方法：1.应用人全基因组表达谱芯片筛选脑出血中风急性期“瘀热阻窍证”患者和非“瘀热阻窍证”患者治疗前与热象炎症反应相关的基因的差异表达以及脑出血中风急性期“瘀热阻窍证”患者治疗前、后与热象炎症反应相关的基因的差异表达。2.应用ELISA法检测脑出血中风急性期“瘀热阻窍证”患者和非“瘀热阻窍证”患者血清中IL-13、IL-1、NF-κB、HSP-70、HSP27的含量变化以及脑出血中风急性期患者治疗后与治疗前血清中IL-1、NF-κB、HSP-70的含量变化。3.应用体外细胞培养方法,以细菌内毒素(LPS)造成的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤模型,通过MTT法和细胞上清液中NO含量的检测来研究凉血通瘀方及含药血清不同浓度对血管内皮细胞炎症损伤模型的保护作用。4.通过流式细胞仪对细胞周期的检测来研究凉血通瘀方不同浓度用药对LPS干预的VECs周期的影响。5.通过透射电镜观察细胞超微结构来研究凉血通瘀方含药血清不同剂量用药对LPS致损伤的VECs的保护作用。研究结果：1.脑出血中风急性期瘀热患者治疗前较之非瘀热患者、治疗后的瘀热患者共筛选出34条与炎症因子相关的基因信号通路发生了改变,其中与IL-2、HSP、IL-1r、IL-12、IL-3、TGF-β、Fas and TNF-α、IL-4、IL-27、IL-6、IL-23相关的基因信号通路的表达有显著差异；脑出血中风急性期瘀热患者治疗前与非瘀热患者治疗前相比,与TNF相关的10条基因有上调大于2倍的表达差异,与HSP相关的6条基因有上调大于2倍的表达差异,趋势明显；脑出血中风急性期瘀热患者以凉血通瘀方治疗后与治疗前相比,与TNF相关的10条基因有下调大于2倍的表达差异,与热休克蛋白HSP相关的3条基因有下调大于2倍的表达差异,趋势明显。提示脑出血中风急性期中“瘀热阻窍证”的“热象”本质与炎症病理的存在相关,凉血通瘀方对于脑出血中风急性期热象炎症反应的疗效也可能与这些相关基因信号通路的表达改变有关。TNF、HSP是参与脑出血中风急性期热象炎症反应的重要介质,在脑出血损伤过程中起到重要的介导作用,阻断TNF导致的损害可能成为保护中风脑出血的一个值得研究的重要方向,HSP的高表达可以作为一种对中风脑出血急性期瘀热证型的诊断及预后判断有实用价值的参考指标。2.脑出血中风急性期瘀热患者血清中IL-1、NF-κB、HSP-70、HSP27的含量比非瘀热患者均有明显的升高,脑出血中风急性期瘀热患者治疗前血清中IL-13的含量比非瘀热患者也有升高的趋势,表明了“热象”炎症病理的存在,而内源性抗炎因子分泌的增加可能由于瘀热患者自身启动了抵挡炎症介质产生损害的、拮抗机制；脑出血中风急性期患者以凉血通瘀方合并基础疗法治疗后与治疗前相比,血清中NF-κB、HSP-70的含量有显著的降低；其中HSP-70的含量在治疗组与对照组的组间比较也有显著的差异；另外IL-1的含量也有降低的趋势。提示脑出血中风急性期中“瘀热阻窍证”的“热象”本质与炎症病理的存在相关；凉血通瘀方药能够抑制脑出血中风急性期患者血清中的炎症相关因子及信号传导通路,对于进一步揭示脑出血中风急性期“瘀热阻窍”型的“热象”可能本质和凉血通瘀方药治疗急性脑出血的作用机制发挥了重要的作用。3.给予LPS刺激24h、36h后,培养液中的MTT还原产物含量显著减少,OD值均低于对照组,凉血通瘀方含药血清中、高剂量组均与模型组比较有显著差异,表明凉血通瘀方药不同浓度在不同时间段内对于炎性损伤的血管内皮细胞有明显的保护作用。预先给予凉血通瘀方药后再给予LPS造成的细胞损伤模型,细胞培养上清液中的NO含量明显减少,与模型组相比有显著差异,细胞受到的损伤明显减轻,说明凉血通瘀方能够拮抗血管内皮细胞由LPS引起的炎症损伤。4.通过流式细胞仪的检测,给予LPS刺激24h后的模型组与对照组相比,S期细胞数量有所升高,G2-M期细胞数量明显降低,同时细胞脱落的碎片率较之对照组有明显的增加,DNA直方图可见明显碎片峰,表明VECs损伤严重,细胞状态很差。与模型组相比,给予中、高浓度用药组的凉血通瘀方24h后,S期细胞数量有下降的趋势,G2-M期的细胞数量有所增加,DNA直方图可见细胞碎片率较之模型组均有下降的趋势,碎片峰也有所降低,表明凉血通瘀方在上述时间点内中、高浓度用药组有抑制VECs损伤的作用,可以改善受损伤的细胞状态。5.透射电镜观察下可见LPS模型损伤组的细胞超微结构明显异常,凉血通瘀方含药血清三个剂量组VEC仅有轻度损伤,多数细胞与正常细胞组相似,尤以高剂量组细胞器状态最接近对照组,表明凉血通瘀方不同浓度对LPS致损伤的VECs细胞状态有显著的改善作用。