目的 1.明确细胞凋亡抑制基因survivin及其相关因子VEGF、caspase-3在人甲状腺癌组织中的表达状态,探讨其与甲状腺癌恶性生物学行为的关系。 2.观测反义寡核苷酸(ASODN)体外封闭人甲状腺癌细胞survivin基因表达、诱导细胞凋亡的效应及其对甲状腺癌细胞生长的影响。 3.观测反义寡核苷酸(ASODN)体外转染甲状腺癌细胞株并制备相应条件培养基作用内皮细胞,封闭VEGF基因表达,测定条件培养基对内皮细胞生长、凋亡状态的影响,验证ASODN能够特异性封闭甲状腺癌细胞VEGF表达,进而抑制内皮细胞生长,干扰肿瘤血管生成,探讨甲状腺癌综合治疗的新途径。 4.通过联合应用survivin和VEGF的反义寡核苷酸对人甲状腺癌裸鼠移植瘤的干预性实验治疗,探讨基因治疗在体甲状腺癌的效应。 方法 1.采用免疫组织化学方法(SABC法)检测68例甲状腺癌、12例甲状腺腺瘤和10例正常甲状腺组织中survivin、caspase-3、VEGF蛋白的表达,比较survivin表达对甲状腺癌主要临床病理学参数的影响及与各因子表达的关系和意义。 2.设计合成特异性靶向survivin的ASODN,以脂质体为载体,按不同浓度和时间对甲状腺髓样癌TT细胞进行转染,并设空白、正义(SODN)对照组同步操作。镜下观察各组细胞生长状态,采用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测各组细胞中survivin mRNA、蛋白表达状态,吖啶橙/溴化乙锭