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醇脱氢酶(ADH)是含锌金属酶,存在于动物、植物及微生物细胞中,催化生物体内伯醇的氧化和醛的还原。在医学分析上,为诊断肝细胞坏死的特异性指标。近年来,随着有机相催化和膜反应器的发展,该酶的应用研究非常活跃。主要包括以下几个方面:作为生物传感器用于分析乙醇浓度;作为催化剂用于化工中生产原料及中间反应物;作为实验材料用于酶固定化、新型解酒剂等。因此,ADH已经成为研究热点之一而应用于医学分析和工业生产等方面。本论文分为四个部分。第一章概述了ADH所受抑制作用的机理,乙醇的定量分析方法及固定化酶的理论知识和应用研究。第二章探讨了抑制剂对ADH催化反应的影响。基于ADH催化乙醇和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的反应,在最佳酶反应条件下,研究了Cd2+和SCN-1对酶催化的抑制作用。通过加入金属离子络合剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA)进行了干扰消除实验,结果表明可有效的消除一定浓度的Cd2+对ADH酶促反应的干扰。考察了Cd2+和SCN-1对ADH荧光光谱的影响,发现其对ADH有荧光静态猝灭现象。用同步荧光技术研究了Cd2+和SCN-1与ADH的相互作用。第三章研究了酶催化动力学荧光法测定乙醇,利用ADH催化乙醇和NAD的反应: C2H5OH + NAD→CH3CHO + NADH,通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)荧光强度的变化率得出其酶促反应速度,对应系列乙醇溶液制得标准曲线,从而可测定试样中的乙醇含量,用该法测定了小牛血清和饮料中的乙醇,结果满意。第四章研究了壳聚糖固定化ADH的制备及酶学性质。以壳聚糖微球作为载体,戊二醛作为交联剂,通过共价结合对ADH进行固定化。讨论了戊二醛浓度,联酶时间,pH值等对ADH固定化的影响。对游离及固定化ADH酶学性质的研究表明,酶促反应的最适pH分别为8.4和8.8,最适温度分别为31℃和26℃,对乙醇的表观米氏常数分别为28.2mmol/L和8.1mmol/L。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性更佳,并具有较好的贮存稳定性和复用性。