论文部分内容阅读
背景与目的已有许多文献报道骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在一定的体外条件下能分化为神经元样细胞。然而目前用以诱导BMSCs分化为神经元样细胞的诱导剂很少被应用于临床。研究者们对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)体外诱导BMSCs分化为神经元样细胞的影响和作用机制还了解甚少。本实验旨在探索VEGF体外对BMSCs分化为神经元样细胞的影响作用,并确定实验中VEGF的最佳的诱导浓度。方法(1) BMSCs取自6～8周雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠体内。细胞传代至第3代时,流式细胞分析鉴定BMSCs表面干细胞标志物CD90和造血干细胞标志物CD45。(2) BMSCS经传代3次后经10ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)预诱导24h。细胞被随机分为5,10,和20ng/mLVEGF处理组和未经VEGF处理的对照组。倒置相差显微镜(×200)下逐日观察细胞形态变化。(3)诱导后的第3天和第10天采用免疫组织化学方法鉴定神经元标志物神经特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE),分别计数每20个随机视野下NSE阳性细胞总数。结果(1)培养第3天可见贴壁细胞,细胞形态各异,以圆形为主,少部分细胞呈三角形、梭形,有粗短突起。原代第7～10天,较多梭形细胞形成集落生长。传代培养2～3代后细胞形态变得较均一,细长梭形细胞较多,呈漩涡样生长,部分细胞呈扁平形。(2)流式细胞分析结果示第3代BMSCs细胞表面干细胞标志物CD90(97.5%)阳性,而造血干细胞标志物CD45阴性。(3)诱导第3天经5,10,和20ng/mLVEGF诱导的组别均可观察到细胞胞体回缩,呈锥形或圆形,胞体折光性增强,伸出较细长双或多极突起,并分出次级突起。而对照组则无此类似现象出现。(4)诱导第10天,经10ng/mLVEGF处理的组别NSE阳性细胞数最多(P<0.05)。诱导第3天和第10天,对照组中NSE阳性细胞数均最少(P<0.05)。诱导第10天各组NSE阳性细胞数目均较第3天增多(P<0.05)。结论(1)在一定条件下,大鼠骨髓基质细胞体外可向神经元样细胞分化。(2)本实验中VEGF能促进骨髓基质细胞体外向神经元样细胞分化;与5和20ng/mL相比,10ng/mL为最合适的浓度。(3)VEGF可能具有应用于诱导BMSCs体外向神经元定向分化和修复中枢神经损伤和神经变性疾病的潜能。