丹参注射液对宫内感染/炎症致早产脑室周围白质软化仔鼠血流变学及凝血功能的影响

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目的:通过观察丹参注射液早期干预对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导Wistar孕鼠宫内感染/炎症致早产脑室周围白质软化(periventricularleukomalacia, PVL)仔鼠血流变学、凝血功能指标的影响,探讨其中医学的病因、病理机制与血瘀证的关系,为临床早期干预应用活血化瘀药物提供实验依据与临床基础。方法:1.宫内感染/炎症致早产PVL仔鼠动物模型的建立∶22只Wistar孕鼠于16d、17d腹腔注射脂多糖溶液(LPS∶350ug/kg·d)为LPS组,另8只正常孕鼠腹腔注射生理盐水为正常对照组,孕鼠分娩后,分别取LPS组及正常对照组孕鼠各2只,及其所生仔鼠各2只,行子宫、胎盘及仔鼠脑组织病理切片HE染色,光镜下观察子宫、胎盘感染情况及脑白质损伤情况。2.分组及干预方法:LPS组孕鼠所生仔鼠随机分为模型组(B)、丹参高剂量组(C)、及丹参低剂量组(D),各组18只。余6只正常对照组孕鼠所生仔鼠中抽取18只为对照组(A)。四组72只仔鼠7日龄始干预,药物以腹腔注射为途径。A、 B组仔鼠注射生理盐水9ml/kg·d; C组注射丹参注射液9ml/kg·d; D组注射丹参注射液4.5ml/kg·d,连续干预2周至21日龄。3.指标检测∶21日龄,随机抽取各组仔鼠9只,腹主动脉采血,行凝血功能指标检测。25日龄时,对各组剩余9只仔鼠腹主动脉采血,行血流变学指标检测。4.一般情况观察及神经行为检测∶观察各组仔鼠的皮肤颜色等一般情况;14d、21d时,分别对A、B、C、D四组仔鼠行神经行为学检测(悬吊试验、旷场试验、斜坡试验),并于21日龄时,各组采血完毕同时随机抽取2只仔鼠,脑组织病理学切片HE染色,观察各组脑白质病理变化情况。结果:1. LPS组22只孕鼠注射脂多糖后较对照组,进食及活明显动减少,毛发不整齐,精神明显萎靡。其中1只意外怀孕,3只流产死亡,3只足月分娩(去除),1只难产而死,2只早产分娩后取用母鼠胎盘及子宫行病理切片,余12只于22天前分娩,共活产早产仔鼠87只,死产34只。对照组8只于孕22~23天分娩,共娩出正常新生仔鼠103只,无死产;其中2只母鼠正常分娩后取用胎盘及子宫行病理切片。与正常孕鼠相较,LPS组孕鼠易早产,活产仔鼠少,且新生仔鼠出生体质量低,应激反应迟钝,皮肤颜色紫暗,甚见瘀斑、瘀点,纹理较多,活动较少;体质量增长缓慢,新生正常组仔鼠反应灵敏,皮肤颜色淡红,纹理正常,体质量正常。2.生长发育、睁眼时间等一般情况∶1)生长发育情况∶出生时B、C、D组仔鼠均赤裸无毛,全身紫暗,纹理稍多,大部分可见瘀斑、瘀点,反应迟钝,活动较少,反应迟钝、体重增长缓慢;14日龄时,B组未睁眼,反应迟钝,爬行缓慢,C组有3只睁眼,爬行不灵活;D组未见睁眼,爬行不灵活;21日龄时,A组断乳,可独立生活,B组体型偏小,未能断乳,独立生活能力差,C组断乳后可独立生活,D组体重增长缓慢,需延迟1~2天断乳,部分可独立生活。2)睁眼时间∶随着丹参注射液的早期干预,高剂量组可显著改善睁眼时间(P<0.05),低剂量组也可改善睁眼时间(P<0.05)。模型组睁眼时间明显延迟于对照组及高剂量组(P<0.05)。3.神经行为检测∶1)悬吊试验∶14日、21日龄仔鼠,与对照组比较,模型组与高、低剂量组在悬吊试验、旷场试验及斜坡试验的评分均偏低(P <0.05)。4.实验室指标检测结果∶1)21日龄仔鼠凝血功能指标检测∶与对照组比较,模型组凝血酶原时间(thromboplastin time, PT)显著缩短(P<0.01),纤维蛋白原(fibrinogen, FIB)含量显著升高(P<0.01),凝血酶时间(thrombin time, TT)无差异性(P>0.05);丹参高、低剂量组PT、FIB、TT检测结果与对照组无明显差别。与模型组比较,高、低剂量丹参注射液均可降低仔鼠FIB含量(P<0.01),延长PT;且丹参注射液高、低剂量组间对仔鼠PT及FIB的改善差异无统计学意义(P>0.05)。2)25日龄仔鼠血流变学指标检测∶与对照组相较,模型组低(1.00s-1、5.00s-1)、中(50s-1)、高(100s-1)切变率下全血粘度及红细胞聚集指数均升高(P<0.01);与模型组相较,高、低剂量丹参注射液均可降低高、中、低切变率下全血粘度及红细胞聚集指数(P<0.05);且高剂量组对低切变率下全血粘度及红细胞聚集指数的改善显著要优于低剂量组(P<0.01)。5.21日龄仔鼠脑组织病理切片HE染色结果∶对照组脑室周围白质相比,模型组脑白质病理改变明显,主要表现为结构疏松、胶质细胞聚集甚成纤维化,并可见脑室周围白质软化灶;丹参注射液早期干预后,与模型组相较,高剂量组脑白质改善明显,结构不疏松,胶质细胞聚集不明显,纤维化不明显;低剂量组脑白质结构稍疏松,仍见脑室周围白质软化灶,海马区白质损伤。说明丹参注射液早期干预可改善宫内感染/炎症致仔鼠早产脑白质软化,而高剂量组效更优。结论:1. LPS诱导的Wistar孕鼠宫内感染/炎症致早产PVL仔鼠存在血流变异常及凝血功能异常。2.丹参注射液早期干预具有改善宫内感染/炎症致早产PVL仔鼠血液“凝”“聚”“结”的作用,即改善血流变异常及凝血功能异常。3.丹参注射液可减轻其脑白质损伤,其机制可能是与降低血液中红细胞聚集性、降低纤维蛋白原以及影响外源性凝血系统各个因子有关。4.宫内感染/炎症致早产仔鼠脑白质软化与中医学“血瘀证”有密切关系,“血瘀”可能是其重要的病理因素,“瘀阻脑窍,脉络不通”可能是其主要病理机制。
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