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禽流感严重威胁人类健康和生命安全，危害养禽业，造成巨大经济损失，而且目前出现了多种亚型禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)共存的局面。疫苗接种仍是当前预防禽流感的重要手段。然而AIV亚型多、易变异的特点，使传统疫苗难以发挥有效的预防作用。因此，如何设计、研制禽流感新型疫苗，尤其是新型多价疫苗的研究是当前亟待解决的重要科学问题。所以本研究构建了针对H5、H7亚型禽流感病毒的DNA重组体，并进行了小鼠免疫试验研究，旨在为最终获得能同时预防多种亚型禽流感病毒的疫苗奠定基础。研究内容如下： 以一株H5N1亚型AIV mRNA为模板，采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了H5N1亚型AIV血凝素(HA)基因cDNA，将其克隆到pUCm-T载体。通过对重组质粒的酶切鉴定及核苷酸序列测定，表明成功克隆了1株H5N1AIV的HA全基因，克隆的基因开放阅读框(ORF)全长为1707bp。以A／African Starling／983／79(H7N1)毒株为模板，人工合成了H7亚型AIV的HA全基因序列，并将其克隆于pMD18-T载体。该基因开放阅读框(ORF)1704bp，编码568个氨基酸。将H5HA、H7HA基因以融合表达方式克隆到真核表达载体pIRES1neo中，并用限制性酶切、PCR、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot等方法对pIRE-H57进行了鉴定与体外表达研究。结果表明，成功构建了共表达H5HA-H7HA基因的DNA重组体pIRE-H57，在Hela细胞中能表达其所携带的外源基因，所表达的目的蛋白具有抗原性。 以BALB／c小鼠为哺乳类试验动物模型，以上述构建的DNA重组体pIRE-H57对其进行免疫接种后，检测体液与细胞免疫指标。研究结果表明，流感病毒共表达DNA重组体pIRE-H57免疫组及灭活苗免疫组的小鼠均能产生特异性抗体(与对照组相比，p＜0.05)。pIRE-H57免疫组抗H5、H7 HA抗体效价分别为1：6400和1：3200，明显高于灭活苗免疫组效价(1：100～1：200)(p＜0.01)。pIRE-H57免疫组抗H3 HA抗体效价(1：200)低于灭活疫苗免疫组(1：12800)，但均高于空质粒pIRE1neo对照组及PBS对照组(p＜0.01)。流式细胞仪检测所得数据统计学分析结果表明，与灭活苗、空质粒pIRE1neo对照组及PBS对照组比较，用所构建的DNA重组体pIRE-H57免疫的试验组小鼠的T