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本研究采用蛋白印迹分析、RNA干扰、细胞计数、MTS分析、台盼蓝染色等实验方法,以Raji细胞和小鼠原代脾脏B(Primary B)细胞为实验对象,研究了二甲双胍通过mTOR/S6K1经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力分子机理。结果如下:1二甲双胍经Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力Raji细胞和Primary B细胞、感染shRNA Erk1/2、shRNA GFP的Raji细胞、或感染Ad-MKK1-R4F、Ad-MKK1-K97M和Ad-GFP的Raji细胞,用不同浓度二甲双胍(1-5 mM)预处理4 h后经hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12或48 h、或用二甲双胍(1.5 mM)预处理4 h后用hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12或48 h、或用Erk1/2抑制剂U0126(5μM)处理1 h后再用hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12或48 h后。Western blot分析相关蛋白表达,分别用细胞计数、MTS分析和台盼蓝染色评估细胞增殖和活力。结果显示,二甲双胍浓度依赖地抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力;二甲双胍抑制hsBAFF诱导B细胞Erk1/2磷酸化;抑制Erk1/2强化二甲双胍抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力;二甲双胍通过MKK1-Erk1/2途径抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。提示:二甲双胍经Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。2二甲双胍经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力Raji细胞和Primary B细胞、或分别感染Ad-PTEN、Ad-dn-Akt和Ad-GFP的Raji细胞,用不同浓度的二甲双胍(1-5 mM)预处理4 h后用hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12 h,或用二甲双胍(1.5 mM)预处理4 h,再用Akt inhibitor X(20μM)或U0126(5μM)处理1 h后,用hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12或48 h。Western blot分析相关蛋白表达,细胞计数、MTS分析分别评估细胞增殖和活力。结果显示,二甲双胍抑制hsBAFF诱导B细胞PTEN和Akt磷酸化;钝化Akt表达增强二甲双胍抑制hsBAFF诱导Erk1/2依赖的B细胞增殖和活力;过表达PTEN强化二甲双胍抑制hsBAFF诱导Akt-Erk1/2依赖的B细胞增殖和活力。提示:二甲双胍经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。3二甲双胍通过mTOR/S6K1信号转导抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力Raji细胞和Primary B细胞、或感染shRNA mTOR和shRNA GFP的Raji细胞,用二甲双胍(1-5 mM或1.5 mM)预处理4 h后再用hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12或48 h、或用二甲双胍(1.5 mM)预处理4 h并用雷帕霉素预(100 ng/ml)处理2 h后,加hsBAFF(2.5μg/ml)刺激12或48 h。Western blot分析相关蛋白表达,细胞计数、MTS分析分别评估细胞增殖和活力。结果显示,二甲双胍抑制hsBAFF诱导B细胞S6K1磷酸化;雷帕霉素强化二甲双胍抑制S6K1和PTEN/Akt-Erk1/2通路削弱hsBAFF刺激B细胞增殖和活力;下调mTOR增强二甲双胍经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。提示:二甲双胍通过mTOR/S6K1经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。