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目的:探讨PARP 活化与辐射剂量的关系以及PARP介导的细胞损伤修复与A549细胞低剂量辐射超敏感性的关系。
方法:用流式分选计数克隆形成法分析不同剂量照射后的细胞存活分数,观察细胞放疗敏感性与放射剂量间的关系;用电镜显微镜观察细胞在不同剂量点和不同时间点下细胞死亡情况,了解细胞死亡模式;用免疫印迹法检测不同剂量点下的PARP蛋白水平和活性变化,绘制不同辐射剂量下的PARP 水平变化曲线,观察其与细胞存活分数间的关系。
结果:⑴ A549细胞在0~0.3Gy之间表现出单位剂量杀伤增强现象,随着剂量的增加曲线变得平滑,在0.3~0.5Gy之间表现出一定的辐射抗性,0.5Gy以后的区域细胞的存活分数随辐射剂量的增加而降低。⑵A549细胞经照射后24 h,部分细胞发生凋亡,其凋亡曲线与存活曲线相吻合。⑶A549细胞经照射后聚ADP核糖聚合酶(PARP)开始出现活化,此后其活化水平随剂量的增加而增高(P<0.05),0.5Gy时活化达到高峰,在其后的剂量区域活化无明显变化(P>0.05)。
结论:A549细胞存在HRS/IRR现象,PARP的活化介导的细胞损伤修复与该现象有一定关系,凋亡是X线照射后细胞死亡的主要方式。