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兜兰属(Paphopedilum)隶属于兰科杓兰亚科,是兰科中最具特色的类群之一,以其盛长的花期和奇特的花型而广受兰花爱好者的关注与喜爱。目前全世界共有79个野生种类记录在案,其中约1/3产中国,就种类而言,中国是世界上兜兰属植物最为丰富的国家。但由于人为采挖和生境破坏,野外兜兰属植物资源濒临灭绝。目前所有兜兰属植物均被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约(CITES)》附录Ⅰ。本文通过形态学和无菌萌发的方法对兜兰胚发育过程及不同胚发育阶段无菌萌发能力进行了研究,为利用种子进行繁育提供理论依据和技术支持,以期通过人工无菌播种的方式,满足人们对兜兰属植物的观赏需要,从而缓解野外资源的压力,进而达到保护野外兜兰属植物资源的目的。
与此同时,我们还观察比较了中国产18种兜兰属种子和6种杓兰属种子,对兜兰属种子的微形态进行研究可以为兜兰属及其与杓兰属种子形态特征的异同及兜兰种子形态特征在生理方面的意义进行了初步探讨。本文主要研究结论如下:
1、通过对授粉后不同时期的兜兰属植物的种子进行GMA树脂切片,观察到三种兜兰属植物从授粉到受精中间间隔时间较长,卷萼兜兰、带叶兜兰不短于70天,而杏黄兜兰约50天左右。受精后的合子经过第一次不均等的横分裂,产生较小的顶细胞和较大的基细胞,基细胞经过几次横分裂衍生出的细胞形成胚柄,顶细胞经过2-4细胞的原胚阶段、圆球形胚阶段、椭球形胚阶段,此后胚柄开始退化消失,种皮逐渐皱缩,种子成熟。成熟种子中的胚也极为简单,细胞数目不足百个,分化简单。
2、胚囊形成之后,在胚囊的内侧壁上有脂类物质的积累,随着种子发育的进行,脂类物质逐渐消失。推测这层脂类可能与胚的发育相关,为种胚的发育提供一个稳定的生理环境,等胚发育成熟后,便退化消失。胚囊之外,由两层薄壁细胞组成的单珠被的外层细胞的径向壁和内切向壁上逐渐积累木质素类物质,在种子横切面上呈马蹄形加厚,该层木质素类物质直到成熟种子之中都一直存在。在成熟的种子中起到保护种子,防止种子受到机械损伤和过度脱水。
3、将种子的发育过程与无菌播种的萌发率结合起来,我们发现:在合子最初形成之时,种子在无菌萌发培养基中不能成功萌发,而随着合子的发育,在2-4细胞原胚及早期圆球形胚阶段,就能有一定程度的萌发,当种子由圆球形胚纵向延伸形成椭球形胚之时,三种兜兰都有最高的萌发率。此后虽然椭球形胚仍在分裂生长,但胚柄细胞已经开始退化,种皮皱缩,萌发率也随之下降。到后期,种皮完全皱缩,在无菌萌发实验中,种子基本不能萌发。推测可能是种皮中木质素类物质的积累导致种皮透水性下降从而使得种子进入休眠,萌发率急剧下降。
4、将搜集到的18种中国产的兜兰属植物种子与6种杓兰属的种子进行形态学和形态测量学的研究后发现,兜兰属和杓兰属种子都很细小,种长从492μm到2031gm不等,一般呈纺锤形,中部膨大,两端渐狭。兜兰属的种皮颜色有浅黄色、褐色乃至黑色,杓兰属种皮颜色相对较浅,由浅黄色至褐色。所观测的种中,除了杏黄兜兰的种皮为不透明的黑色外,其余种类均为透明或半透明,且总体来说,杓兰种皮细胞的透明性要比兜兰更好,种皮细胞都形成网状纹理,本研究中多种兜兰属的种子形态均为第一次报道。
5、18种兜兰属的气囊体积比与Cribb1998年的分类系统比较后发现,种子和胚的大小在组间没有明显差异,而气囊体积比在兜兰组间差别明显。