原核生物、哺乳动物细胞在食品工业领域具有广泛的应用潜力,基于合成生物技术制备的食品添加剂、酶、人造奶等新型食品或食品原料不断进入人们的视野。有研究表明,脂联素与人体的营养健康状态密切相关,已证实脂联素在调节胰岛素水平、癌症预防领域具有重要作用,并且脂联素在血清中的含量可作为糖尿病、心血管疾病的重要生物标志物。本研究主要聚焦于重组脂联素蛋白的表达,以脂联素的核心组成部分球状域蛋白gAd为研究对象,分别基于原核表达、哺乳动物表达体系实现gAd蛋白的重组表达,在此基础上,基于杂交瘤细胞融合技术制备抗gAd的单克隆抗体,以期为规模化制备脂联素以及脂联素的免疫分析快速检测产品的开发提供关键原料。本研究的主要内容如下:1)基于合成人脂联素球状域蛋白（gAd）基因的基础上,分别构建了gAd与四种标签蛋白（NusA、MBP、GST和SUMO）的融合蛋白表达载体pET30a-gAd-NusA、pET30a-gAd-MBP、pET30a-gAd-GST、pET30a-gAd-SUMO,采用IPTG诱导经大肠杆E.coli BL21进行原核表达,结果显示,pET30a-gAd-NusA、pET30a-gAd-MBP表达出可溶性的gAd-NusA、gAd-MBP融合蛋白,其表达产量分别为10 mg/L、14 mg/L,SDS-PAGE及ELISA分别鉴定纯化后的融合蛋白,结果显示两种融合蛋白的纯度均大于90%,且与抗人脂联素（ADPN）抗体具有特异性结合。2)本研究开展了基于诱导温度、IPTG诱导浓度优化的可溶性gAd蛋白的原核表达研究。结果显示,在诱导温度12℃、IPTG浓度为0.05 mmol/L的表达条件下,pET30a-gAd表达载体在E.coli BL21中实现了可溶性表达,其纯化后的表达量为2 mg/L,SDS-PAGE及ELISA鉴定纯化后的gAd蛋白,结果显示,可溶性的gAd蛋白以单体、二聚体、三聚体三种形式存在,且均与抗人脂联素（ADPN）抗体具有特异性结合。3)本研究构建了gAd的真核表达载体pCDNA3.1-gAd-EGFP。采用PEI试剂作为转染试剂,以Expi 293细胞为宿主开展了gAd蛋白的瞬时转染研究。结果显示,pCDNA3.1-gAd-EGFP表达载体在Expi 293细胞中获得了重组表达,其表达产量为4μg/mL,SDS-PAGE、Western blot结果显示存在三种不同分子量的表达产物且均可与抗人脂联素单克隆抗体特异性结合。4)本研究还开展了基于CHO-S细胞,构建稳定表达重组gAd-EGFP蛋白的CHO细胞株的研究。以pCDNA3.1-gAd-EGFP为表达载体,对贴壁CHO-S细胞进行转染,优化的转染条件为:细胞密度为3×10~6个/mL、PEI的添加量为4μg/mL、质粒的添加量为2μg/mL。经过含G418培养基筛选及三次亚克隆后,获得三株稳定表达重组gAd-EGFP蛋白的细胞,分别命名为4D11、4G11和2F12。在此基础上,对上述三株细胞成功进行了悬浮培养驯化,并将其中一株细胞（4D11）进行放大悬浮培养,其表达重组gAd-EGFP蛋白的产量为6 mg/L,与瞬时转染表达获得的gAd-EGFP重组蛋白一致。5)以gAd为免疫抗原免疫3只Balb/c系雌性小鼠,制备杂交瘤融合细胞,后经过三次亚克隆,最终获得8株可特异性分泌抗gAd抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7D10、3B7、9B10、3A7、9E2、3H9、2C8和7B9。制备单克隆抗体腹水并测定其效价,结果显示,制备的8株单克隆抗体腹水效价范围为1:128000-1:2560000。生物膜层干涉技术检测9B10株和3A7株单克隆抗体的亲和力常数分别为5.281×10-10 mol/L、1.033×10-9 mol/L,抗体具有较高的亲和力,可应用于脂联素免疫分析产品的制造。