固定化酶反应器作为蛋白质组学研究中"bottom-up"策略重要的组件,对于发展高效快速的蛋白质组学分析方法具有重要意义。将纳米颗粒与有机-无机杂化整体材料结合,制备纳米颗粒复合杂化整体固定化酶反应器。充分利用纳米颗粒比表面积高,孔径易控制以及杂化整体材料操作简单,传质速度快,易于改性等优点,能够更有效地实现蛋白质的快速酶解。有机-无机杂化整体材料以四乙氧基硅烷(TEOS)和3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)为单体,修饰氨基的的纳米颗粒包埋在有机无机杂化整体材料中形成复合基质,采用交联剂戊二醛在复合基质上共价键合胰蛋白酶,获得纳米颗粒复合杂化整体胰蛋白酶反应器。在最佳的制备与酶解条件下,分别对标准蛋白牛血清白蛋白,肌红蛋白,细胞色素C酶解,得到的序列覆盖度分别为50%,93%,71%。此外,实现了复杂样品牛奶蛋白和鼠肝蛋白快速、高效地酶解。此纳米颗粒复合杂化整体胰蛋白酶反应器对于复杂样品的高通量分析具有巨大的潜质。由于酶对于蛋白质具有特异性的酶切位点,结合不同的蛋白酶共同作用将有效提高蛋白质鉴定的可信度。则利用修饰羧基的纳米颗粒与有机-无机杂化整体材料制备复合基质,再以戊二醛为间隔臂在整体基质上共价键合胰蛋白酶,以铜离子螯合法在纳米颗粒上固定糜蛋白酶,获得纳米颗粒复合杂化整体双酶反应器。在最佳条件下,此纳米颗粒复合杂化整体双酶反应器实现了对膜蛋白的快速分析,从鼠肝提取的膜蛋白中鉴定出536种蛋白。相比于单酶反应器,纳米颗粒复合杂化整体双酶反应器对膜蛋白的鉴定表现出一定的优势,有望为蛋白质组学研究提供一种可能的新手段。