论文部分内容阅读
目的: 明确ASIC3和P2X3是否存在交互作用以及在疼痛和艾灸镇痛中的作用。 方法: 1. 采用细胞培养结合膜片钳技术,明确P2X3和ASIC3的交互作用及质子结合位点和胞内外钙离子浓度对交互作用的影响。 2. 采用SD大鼠在体动物实验,在大鼠左侧足底分别或同时注射ASIC3和P2X3激动剂或者抑制剂,明确P2X3和ASIC3的交互作用与疼痛的关系。 3. 采用SD大鼠在体动物实验,先给予大鼠左侧足底分别或同时注射ASIC3和P2X3激动剂或者抑制剂,然后给予艾灸“足三里”治疗干预,明确P2X3和ASIC3的交互作用对艾灸镇痛效应的影响。 4. 统计分析:采用pclamp 9.0、Origin 8.0和Graphpad 6.0分别对离体、在体实验数据进行统计分析。 结果: 1. 离体实验结果:在共转染rASIC3和rP2X3的CHO细胞中,持续性激活ASIC3,可以显著抑制α,β-meATP引起的P2X3电流反应(P<0.05);持续性激活P2X3受体,对pH引起的ASIC3电流没有影响(p>0.05)。α,β-meATP快速抑制ASIC3非质子结合位点激活剂GMQ(2-胍-4-甲基喹唑啉盐酸盐)引起持续性开放电流(P<0.05);胞内外钙浓度的变化可逆转持续性激活ASIC3对P2X3电流的抑制作用(p<0.05)。 2.ASIC3/P2X3对疼痛的影响结果:足底单独注射ASIC3激动剂pH 6.0或P2X3激动剂100 nMα,β-meATP,大鼠痛阈显著降低(P<0.05),但其降低可分别被ASIC3抑制剂APETX2(20 μM)和P2X3抑制剂A-317491(100 nM)逆转(P<0.05);同时注射ASIC3激动剂pH 6.0和P2X3激动剂100 nM α,β-meATP时,大鼠痛阈显著下降(P<0.05),但是并没有发生叠加(P>0.05)。 3. ASIC3和P2X3对艾灸镇痛作用的影响。艾灸治疗对ASIC3激动剂诱导的的疼痛反应有短暂的缓解(在检测的第30 min)(P<0.05);而艾灸治疗并没有改变P2X3激动剂诱导的疼痛反应(P>0.05)。艾灸治疗可以短暂缓解共用ASIC3激动剂pH 6.0和P2X3激动剂100 nMα,β-meATP诱导的疼痛反应(在检测的0 min)(P<0.05)。 结论: 1. ASIC3与P2X3具有单向抑制性交互作用; 2. ASIC3/P2X3交互参与局部疼痛调节,但并没有发生疼痛叠加; 3. ASIC3/P2X3交互作用对艾灸镇痛没有影响;主要是ASCI3而非P2X3对艾灸镇痛作用产生影响。