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目的:应用左前降支结扎构建心梗后心衰大鼠动物模型,给予左前降支结扎大鼠高胆碱饮食喂养;应用细胞缺氧盒构建心肌细胞缺氧体外模型,给予缺氧细胞加入TMAO干预。研究鹿芪颗粒对肠道菌群及其代谢产物TMAO的影响,探讨鹿芪颗粒保护心肌细胞,延缓心肌纤维化的机制。方法:1.动物试验:将Wistar大鼠随机分为7组,Sham组、AMI组、TMAO组、Bifico组、BT组、Lu组、LT组。应用左前降支结扎构建心梗后心衰动物模型,给予左前降支结扎大鼠高胆碱饮食喂养,于造模后6周检测:(1)大鼠盲肠菌群检测;(2)心脏彩超:LVEF、FS、LVEDD、LVESD、SV;(3)血清TMAO水平检测;(4)心脏病理检测;(5)Western blot检测:TRL4、NF-κB、TNF-α、clv-Caspase3、BAX、TGF-β1、Smad3蛋白水平;(6)RT-PCR检测TRL4、NF-κB、TNF-α、m RNA的相对含量;(7)大鼠心脏病理HE染色、Masson染色;(8)大鼠回肠病理HE染色。2.细胞实验:将H9C2心肌细胞随机分为6组,CON组、AMI组、TMAO组、Lu组、LT组、TAK-242组。应用细胞缺氧盒构建心肌细胞缺氧体外模型,给予缺氧细胞加入TMAO干预,观察:(1)运用CCK8技术,检测各组6H,12H,24H心肌细胞缺氧情况下TMAO对心肌细胞存活率的影响;(2)WB检测细胞TLR4、TNF-α、BCL-2的蛋白水平;(3)RT-PCR检测TLR4、TNF-α、IL-1βm RNA的相对含量;(4)细胞免疫荧光检测TNF-α、Caspase3水平。结果:1.动物实验:与Sham组相比,AMI组及TMAO组大鼠在第6周出现心功能降低(P<0.05);血清TMAO水平显著升高(P<0.05);大鼠肠道菌群物种丰度普遍降低,疣微菌门(Verrucomicrobia)及其下属阿克曼氏菌丰度(Akkermansia)丰度降低;AMI组及TMAO组心脏病理可见心肌细胞坏死,炎症细胞侵润,胶原纤维增生;AMI组及TMAO组大鼠回肠病理可见肠粘膜明显增厚,炎症细胞浸润,肠绒毛排列杂乱;AMI组及TMAO组的TLR4蛋白及m RNA含量显著升高(P<0.01),AMI组及TMAO组的NF-κB蛋白含量显著升高(P<0.001),AMI组(P>0.05)及TMAO组(P<0.05)的NF-κB m RNA表达水平增高;AMI组及TMAO组TNF-α蛋白含量显著升高(P<0.01);TMAO组IL-1βm RNA含量显著升高(P<0.01);AMI组及TMAO组clv-Caspase3的蛋白表达水平明显增高(P<0.01);AMI组及TMAO组BAX的蛋白表达水平明显增高(P<0.001);AMI组、TMAO组TGF-β1的蛋白表达水平明显增高(P<0.001);AMI组及TMAO组Smad3的蛋白表达水平明显增高(P<0.001)。与AMI组相比,Bifico组及Lu组的心功能改善(P<0.05),与TMAO组相比,BT组与LT组的心功能改善(P<0.05);与AMI组相比,Bifico组(P>0.05)及Lu组(P<0.05)TMAO的水平降低,与TMAO组相比,BT组与LT组TMAO水平明显降低(P<0.01);与AMI组及TMAO组相比,BT及LT组物种丰度增加;BT组未增加Verrucomicrobia及其下属Akkermansia菌丰度;LT组则增加了Verrucomicrobia及其下属Akkermansia菌丰度;与AMI组及TMAO组相比,益生菌组及鹿芪颗粒组心脏病理结果均有不同程度的减轻。与AMI组及TMAO组相比,应益生菌及鹿芪颗粒干预组大鼠回肠病理结果均有不同程度的减轻。与AMI组相比,Lu组(P>0.05)及Bifico组(P>0.05)TLR4蛋白含量有所降低,但未有统计学意义;与TMAO组相比,LT组及BT组TLR4蛋白含量显著降低(P<0.001)。与AMI组相比,Lu组(P<0.001)及Bifico组(P>0.05)TLR4 m RNA含量有所降低,但Bifico组未有统计学意义;与TMAO组相比,LT组及BT组TLR4 m RNA含量显著降低(P<0.001)。与AMI组相比,Lu组及Bifico组的NF-κB蛋白含量降低(P>0.05),与TMAO组相比,LT组及BT组的NF-κB蛋白含量显著降低(P<0.001)。与AMI组相比,Lu组(P>0.05)及Bifico组(P<0.0001)TNF-α蛋白含量降低。与TMAO组相比,LT组及BT组TNF-α蛋白含量显著降低(P<0.01);与AMI组相比,Lu组(P>0.05)及Bifico组(P>0.05)IL-1β蛋白含量降低,统计学差异不显著,与TMAO组相比,LT组及BT组IL-1β蛋白含量显著降低(P<0.01)。较AMI组相比,Bifico组及Lu组大鼠的clv-Caspase3的蛋白表达水平明显降低(P<0.01),较TMAO组相比,BT组及LT组clv-caspase3的蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。较AMI组相比,Bifico组(P>0.05)及Lu组(P<0.01)大鼠的BAX的蛋白表达水平明显降低。较TMAO组相比,BT组及LT组BAX的蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。较AMI组相比,Bifico组(P>0.05)及Lu组(P>0.05)大鼠的TGF-β1的蛋白表达水平降低,但未有统计学意义。较TMAO组相比,BT组及LT组TGF-β1的蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。较AMI组相比,Bifico组及Lu组大鼠的Smad3的蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。较TMAO组相比,BT组及LT组Smad3的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。2.细胞实验:与CON组H9C2心肌细胞相比,当TMAO浓度达到180 umol/l,缺氧时间为24小时,细胞存活率达80%。与CON组相比,AMI组H9C2心肌细胞培养液呈玫红色,细胞部分皱缩,细胞边缘部分浮起。TMAO组H9C2心肌细胞培养液呈橘黄色,细胞形态普遍皱缩,细胞边缘浮起。与CON组相比,AMI组及TMAO组TLR4蛋白及m RNA含量显著升高(P<0.01);AMI组及TMAO组TNF-α蛋白及m RNA含量显著升高(P<0.001);TMAO组IL-1βm RNA含量显著升高(P<0.01);AMI组及TMAO组的BCL-2蛋白表达量降低;AMI组及TMAO组表达Caspase3的阳性细胞强度显著增加。与AMI组相比,Lu组H9C2心肌细胞培养液呈淡红色,细胞形态规则,略有皱缩。LT组H9C2心肌细胞培养液呈淡红色,细胞形态较Lu组皱缩较重。TAK-242组H9C2心肌细胞培养液呈淡红色,细胞形态较规则。与AMI组相比,Lu组及TAK-242组TLR4蛋白含量有所降低,但未有统计学意义(P>0.05)。与TMAO组相比,LT组及TAK-242组TLR4蛋白含量显著降低(P<0.001)。与AMI组相比,Lu组TRL4 m RNA含量有所降低,但未有统计学意义(P>0.05)。与TMAO组相比,LT组及TAK-242组TRL4 m RNA含量显著降低(P<0.001)。与AMI组相比,Lu组TNF-α蛋白含量显著降低(P<0.05)。与TMAO组相比,LT组TNF-α蛋白含量降低,但未有统计学意义(P>0.05)。与AMI组相比,Lu组TNF-αm RNA含量降低,但未有统计学意义(P>0.05)。与TMAO组相比,LT组及TAK-242组的TNF-αm RNA含量显著降低(P<0.05)。TMAO组的IL-1βm RNA显著高于AMI组(P<0.01)。与AMI组相比,Lu组的IL-1βm RNA降低(P>0.05)未见统计学意义。与TMAO组相比,LT组及TAK-242组的IL-1βm RNA显著降低(P<0.01)。与AMI组及TMAO组相比,Lu组及LT组的BCL-2表达量未见明显变化。Lu组及TAK242组较AMI组及TMAO组相比Caspase3的阳性细胞强度显著降低。Lu组、LT组及TAK242组较AMI组及TMAO组相比TNF-α的阳性细胞强度显著降低。结论:1.经体内研究,鹿芪颗粒可通过增加疣微菌门(Verrucomicrobia)及其下属阿克曼氏菌(Akkermansia,AKK菌)丰度水平和改善肠道屏障功能,降低血清中TMAO水平保护心脏功能。2.经体外研究证实,鹿芪颗粒能抑制TMAO介导的TLR4的过度激活,降低IL-1β及TNF-α水平,抑制TMAO对缺氧心肌细胞的损伤。3.进一步体内证实,鹿芪颗粒可通过抑制TMAO介导的TLR4/NF-κB的过度激活抑制TMAO介导的心肌细胞凋亡,降低IL-1β及TNF-α水平抑制TGF-β1/Smad3通路,延缓心肌纤维化。