柳穿鱼黄素对人鼻咽癌C666-1细胞抗肿瘤作用的实验研究

来源 :第二军医大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:wxtncxmmm
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方高发恶性肿瘤之一,发病率为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首;在流行病学、遗传学和地理分布上都有其显著的特征。尽管放射治疗对早期鼻咽癌可以达到较高的治愈率,但是对于晚期鼻咽癌,放射治疗却很难达到令人满意的治疗效果。鼻咽癌局部复发和频发的癌细胞远处转移是导致鼻咽癌患者经过放射治疗后失败的两大主要原因[1]。因此需要探索新的治疗手段来降低鼻咽癌的发病率和病情的严重程度。柳穿鱼黄素是药用植物大蓟科飞机草中的一种活性成分。飞机草这种植物在临床治疗中通常是用于制作止血类药物。研究表明柳穿鱼黄素发挥了有效的细胞毒活性[2,3]。因此,柳穿鱼黄素显示了治愈细胞增殖异常类疾病的可能性,比如癌症;而且吸引了研究者考虑将其作为化疗药物的备选。柳穿鱼黄素已经表现出具有使细胞凋亡的活性,但是具体的凋亡机制尚未研究明了。柳穿鱼黄素抗鼻咽癌作用未见报道,本课题组拟通过细胞实验和动物实验,了解柳穿鱼黄素对鼻咽癌C666-1细胞的体内外抗肿瘤作用,并进一步了解其抗癌作用机制,为深层次使用柳穿鱼黄素抗鼻咽癌打下基础。第一部分柳穿鱼黄素体外抗鼻咽癌C666-1细胞作用研究方法通过采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术和Western Blot检测,了解柳穿鱼黄素对鼻咽癌C666-1细胞增殖以及凋亡的影响,寻找其抗鼻咽癌作用机制;并通过Transwell迁移实验及划痕迁移实验了解柳穿鱼黄素对鼻咽癌C666-1细胞迁移的影响。结果CCK-8实验结果,在C666-1细胞中加入柳穿鱼黄素,浓度范围从2至512微克/毫升,处理时间为24小时。与对照组DMSO比较,柳穿鱼黄素处理组表现为剂量依赖性抗增殖活性。克隆形成实验结果,C666-1细胞在浓度40微克/毫升的柳穿鱼黄素处理组的克隆数相对比于DMSO处理组降低近66.4%(P<0.01),差异有统计学意义。经流式细胞仪检测发现,与对照组比较柳穿鱼黄素具有促进C666-1细胞凋亡的作用;与对照组比较C666-1细胞经过柳穿鱼黄素处理后线粒体膜电位呈塌陷状态,24小时后细胞内ROS水平增加。Western blot检测结果表明,与对照组比较,柳穿鱼黄素处理组细胞内Cleaved Caspase-3、9蛋白表达升高。Transwell实验中迁移细胞数在柳穿鱼黄素处理组低于在DMSO对照组中的细胞数(P<0.05),差异有统计学意义;划痕实验中,在柳穿鱼黄素处理组的细胞相对迁移距离小于DMSO对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论柳穿鱼黄素具有抑制人鼻咽癌C666-1细胞增殖、迁移及诱导细胞凋亡的作用,可能与其升高细胞内Cleaved Caspase-3、9蛋白表达及ROS水平,触发线粒体通路介导的细胞凋亡。第二部分柳穿鱼黄素对C666-1细胞裸鼠移植瘤的作用方法建立人鼻咽癌C666-1裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、柳穿鱼黄素高、中、低剂量组(80、40、20mg/kg/d组)、顺铂组(DDP),分别腹腔注射给药。4周后处死裸鼠,比较各组的抑瘤作用;对裸鼠移植瘤标本进行光镜、原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,并通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)、免疫组织化学方法检测标本中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-XL和active Caspase-3的表达变化;并通过实验了解柳穿鱼黄素对裸鼠的毒性影响。结果实验结束后,各实验组裸鼠移植瘤体积及质量均小于对照组(P<0.01);各实验组移植瘤组织中Bax、active Caspase-3蛋白的表达高于对照组(P<0.01),Bcl-XL蛋白的表达低于对照组(P<0.05);TUNEL结果显示各实验组移植瘤组织细胞凋亡指数高于对照组(P<0.01)。高剂量柳穿鱼黄素对裸鼠外周血常规无明显抑制作用(P>0.05),病理组织学检查显示对心脏、肝脏和肾脏无明显毒性。结论柳穿鱼黄素可抑制人鼻咽癌C666-1裸鼠移植瘤的生长且对裸鼠无明显毒性,其主要通过诱导鼻咽癌细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,具体机制可能与升高Bax和active Caspase-3蛋白表达,降低Bcl-XL蛋白表达,触发线粒体通路的细胞凋亡有关。
其他文献
美国动画在长期的创作探索中,在音乐功能的开发和运用上形成了独特的风格,对这种音乐思维创作形式进行一定的研究分析,是动画视听语言的理论探究中不可缺少的部分,对中国动画
我们学习历史,并不是为了证明过往的时代都是错误的,“如今才是唯一”。否则,我们便不可能真正从历史中收获什么有益的经验教训
把师生作为此在,强调师生的此在性,这不是对师生的否弃,而是从存在论视角对师生生命存在的追问与反思。此在师生是在教育中以共在方式存在着的能在者,自在存在、共在存在与本
研究目的通过测定雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)在妊娠期子宫肌瘤组织及正常子宫平滑肌组织中的表达情况以及妊娠期子宫肌瘤的
基于中国261个地级及以上城市的面板数据,采用数据包络分析方法(DEA)对中国城市全要素生产率增长差异和各区域城市生产率增长的收敛性进行了实证分析。结果表明:中国城市总体
以板框压滤机脱水泥饼为研究对象,对板框污泥好氧堆肥进行了研究,对比堆肥前后污泥的理化性质、营养成分、卫生学指标及重金属的变化,并采用BCR提取-电感耦合发射光谱法对堆
本文分析了水工业用泵的市场情况和用泵的种类,介绍了泵的节能产品和节能技术;提出了泵的发展趋势以及今后技术投入重点,为研究和了解水工业用泵的形势,提供一些有价值的资料
《烟草控制框架公约》从2003年通过到2005年正式生效,各国采取了一系列有效的控烟措施。随着控烟、禁烟呼声的高涨,以及多国提高烟草产品的消费税、加强对烟草产品的消费和广
我国是人口大国,确保13亿人口的粮食安全是我国的一项重要的战略任务。为稳定粮食生产,提高农民种粮积极性,国家出台了一系列粮食生产补贴政策,包括粮食直接补贴、良种补贴及
<正> 目前的冼衣机不具有消毒杀菌的功能。本专利主要作用于使水形成一种具有去污消毒、杀菌能力的液体。当附有汗渍、油渍、奶渍、果汁菜汁等有机物的衣物放入此液体时衣物