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目的:本研究在前期临床和实验有效基础上,探讨泻火平突散、活血平突散、养目平突散治疗TAO的机制。观察三种中药复方对IFN-?、IL-4刺激后RFs增殖的影响以及对IFN-?、IL-4刺激后RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB等信号转导通路表达的影响。方法:1.原代、传代培养RFs并进行鉴定。眼球后结缔组织取自于眼外伤或其他眼部手术患者,取2-8代细胞进行实验。采用倒置相差显微镜察看RFs状态,并用免疫细胞化学染色法鉴定。2.IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)及含药血清(20%)刺激RFs后,MTT比色法检测中药含药血清对RFs活力影响。3.RFs与IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)以及三种含药血清共同孵育48小时后,免疫细胞化学染色检测IFN-γ、IL-4和三种含药血清对RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB的影响。结果:1.体外成功培养出正常人眼球后成纤维细胞,光镜下观察成活细胞形态,呈放射状,多为梭形和大多角形,约6-10天逐渐生长融合成单层铺满培养瓶底。细胞鉴定结果显示纤维原细胞的标记vimentin为阳性,cytokeration为阴性,提示为实验所需纯净的球后成纤维细胞。2.在前期实验基础上,结果表明中药复方含药血清对RFs有抑制作用,并在中剂量(20%含药血清)时最为明显。3.MTT法检测三种中药复方对IFN-γ和IL-4刺激后RFs活力的影响,空白对照组、正常大鼠血清对照组两组对比无统计学意义(P>0.05);正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组OD值均较空白对照组、正常大鼠血清对照组明显升高,有统计学意义(P<0.05);药1、药2、药3干预组OD值均较正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组明显降低,有统计学意义(P<0.05);4.免疫组化法检测ERK1/2的活性,空白对照组、正常大鼠血清对照组两组相比无统计学差异(P>0.05);正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组ERK1/2的活性均较空白对照组、正常大鼠血清对照组明显升高,有统计学意义(P<0.05);药1、药2、药3干预组ERK1/2活性均较正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组明显降低,有统计学意义(P<0.05)。JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB结果同上。结论:IFN-γ、IL-4可刺激RFs的增殖。20%的中药含药血清可明显抑制RFs的增殖。中药含药血清能抑制IFN-γ、IL-4刺激后RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB的活性表达,从而阻断信号转导通路,减少TAO的免疫损伤。