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镉可以诱导机体多种组织细胞发生凋亡。研究镉诱导细胞的凋亡对于镉的分子毒理学机制的阐明和镉所致的损伤与致癌机理的研究具有重要意义。本文对镉诱导细胞凋亡发生机制作了如下研究工作: 1 镉诱导HEK293细胞凋亡与DNA损伤 在37℃、5%CO2条件下,HEK 293细胞分别在不同浓度氯化镉和N-乙酰半胱氨酸的10%小牛血清DMEM培养液中孵育6-8小时后,用MTT染色检测细胞生长抑制,台盼蓝染色检测细胞死亡率,丫啶橙/溴乙啶双荧光染色检测细胞凋亡率,以琼脂糖凝胶电泳DNA Ladder检测细胞DNA损伤。结果显示:不同浓度的镉离子能不同程度地诱导HEK 293细胞的凋亡,并呈现剂量效应正相关,其细胞DNA也不同程度的出现DNA ladder现象。提示:镉能引起HEK 293细胞的凋亡并引起DNA损伤。 2 镉诱导HEK293细胞凋亡的线粒体途径 通过激光共聚焦技术,以罗丹明123为探针实时监测HEK 293细胞线粒体膜电位水平及其变化规律,通过流式细胞术分别以DCFH-DA和罗丹明123为探针检测镉诱导以及N-乙酰半胱氨酸共处理的镉诱导细胞的胞内ROS水平和线粒体膜电位。结果显示:镉离子可导致HEK 293细胞线粒体膜电位失去节律变化特征并大幅下降从而导致细胞凋亡。 3 镉诱导HEK293细胞凋亡与Bcl-2抗凋亡作用 建立以pcDNA3/Bcl-2转染的HEK 293 Bcl-2过表达细胞作为研究对象,通过激光共聚焦技术,以罗丹明123为探针实时监测HEK 293细胞线粒体膜电位水平及其变化规律。以Western蛋白印迹法检测胞内Caspase-3和Bcl-2的表达水平。以琼脂糖凝胶电泳DNA ladder检测DNA损伤。结果显示:Bcl-2