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前言 DNA的稳定性不断受到外源性或内源性致癌物侵扰，大部分损伤可通过DNA损伤修复系统清除或修复。而DNA损伤修复是一个涉及许多酶和蛋白质参与的复杂过程。一旦相关修复基因发生突变，就会导致整个基因组DNA修复能力低下，从而引起包括癌变在内的不良后果。不仅基因突变诱发的DNA修复蛋白缺失可导致DNA修复缺陷，DNA修复基因的多态性也可改变修复酶的结构并影响其癌症易感性。 XRCC1(X-ray repair cross complementing group 1)，X射线损伤修复交叉互补基因是一种DNA损伤修复基因。其蛋白作为骨架蛋白，可直接与DNA损伤修复机制中的相关蛋白多聚(ADP-核糖)多聚酶(PARP)，DNA聚合酶β(polβ)，DNA连接酶(LigⅢ)以及多核苷酸激酶(PNK)相结合形成复合体，协作参与碱基切除修复和单链断裂修复。 shen et al发现了该基因三种多态，分别在密码子194(Arg—Trp)，密码子280(Arg—His)和密码子399(Arg—Gln)。尽管XRCC1基因多态的功能效应还未能阐明，但R399Gln突变是在COOH端与PARP作用域，即BRCT1域。这很可能影响复合物的结合或修复效能。 DNA修复基因多态作为个体损伤修复能力差异的分子遗传学基础，可能是肺癌的遗传易感因素，XRCC1Arg399Gln多态在非吸烟女性中的分布及其与肺癌发生的关系未见报道。我们用PCR-RFLP方法对沈阳地区非吸烟女性肺癌的病例及其对照测定了XRCC1 399密码子位点的基因型，以分析非吸烟女性肺癌的遗传易感性。并探讨油烟暴露与基因多态的交互作用对患癌风险的影响。 实验材料 病例为2003年1月至2004年1月在中国医科大学附属医院及辽宁省肿瘤医院进行手术治疗的非吸烟女性肺癌患者50例，所有患者都经组织病理学确诊。无肿瘤病史和体征的正常对照选自同时期内入院手术非肺癌的其他肺部疾病患者50例。按年龄(土5岁)与病例相匹配。在收集组织标本的同时，收集每个研究对象详细的人口学资料以及相关危险因素暴露资料。实验方法 用于基因分析的DNA来源于手术切除肺部癌旁或病灶旁“正常组织”。基因组DNA用TRIR已牲界nt一RNA，DNA，蛋白分离试剂按照使用方法提取。采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(pol卿erase chainre-action一restrictionfr嗯ment length pDlym呷玩sm，PCR一RFLp)方法分析XRCCI基因Arg399Gln多态基因型。扩增含A砂99Gin多态的引物为5’一TTGTGC明[’I’ CTCT引限TCC一3’和5’代CTCCAGCCI，Fl，1℃TGATA一3’，产物为6 15bp。PCR反应体系(25ul)含模板DNAD.5一1此，各引物20Pm心L，dN飞T佗.5~OFL，5 U Taq聚合酶(毛J恤Ra Bioteelmology Co.，Ltd)及2.5闪10 x PCR buffer(Tris一HCLPE名.3100mmol/L，KC巧00rxnnoFL，M邪奴巧~ol/L)。扩增A吧399Gin多态位点的代R反应条件为94℃预变性2分钟，然后94℃30秒，56℃30秒，和7二巴℃30秒，30个循环后72℃延伸10分钟。 用限制酶MsPI(TaKaRa Biotechnolo盯CO.，ud)消化A嘟99Gin多态。将PCR产物37℃消化过夜，消化产物在2%的琼脂糖凝胶上电泳。野生型399Arg等位基因出现377bp和238坤两条带，纯和突变型Cb了Cln出现未切断的615bp片段，杂合子A喇Gln则出现377饰，238坤和615bp三条带。 统计学分析:以XZ检验比较各基因型，相关危险因素暴露在病例与对照之间分布的差异。以比值比(odd”LtiOS，OR)及其95%可信区限表示相对危险度。采用logisti。回归模型分析多态基因型与肺癌的相关关系及其与油烟暴露的交互作用。油烟暴露的定义为:经常从事烹饪，且在烹饪过程中感到油烟刺激眼睛。所用统计软件为S只粥11.5版本。结果 肺癌中鳞癌16例，腺癌26例。所有的研究对象为沈阳地区女性。年龄范围36一77岁，病例组与对照组间年龄、煤烟暴露史、被动吸烟史、亲属家癌史均无显著性差异。但肺癌患者油烟暴露比例显著高于对照组(48%vs 22%，P<0.05)。油烟暴露引起肺癌的相对危险度OR为3.27(95%Cl1 .37一7.81)。 1.基因型的分布情况: 在50名正常对照中27名(54%)为XRCCIA喇Arg基因型，21名(42%)为xRCCIA恻Gln基因型，2名(4%)为XRCCI Gb了Gln基因型。肺癌病例组A恻A飞，A州肠，C】11洲，Gln基因型频率分别为科%，40%，16%。对照组中399Gln等位基因频率为25%。肺癌组的399GIn频率为36%。经卡方检验无显著性差异。但当肺癌病例组按病理组织类型分层分析时发现，腺癌组中Ar留A吧，Arg/(湘和Gh“Gln基因型频率分别为30.8%，42.3%和26.9%，与对照组(54%，42%和4%，p<0.05)存在显著性差异。鳞癌与其他类型组中的基因型频率与对照组间无差异。 2.xRcclA够99GIn多态与非吸烟女性肺癌易感性的关系 以携带A耳必A嗯基因型为参考人群，调整年龄及油烟暴露因素后，XRCC1399Gb丫Gln基因型携带者患肺癌的危险性增高，但无统计学意义(调整oR二5.4395%cl 0.99一29.’7)。如果按照肺癌的病理类型分层分析，携带至少一个Qn等位基因的个体患肺腺癌的风险是未携带个体的2.29倍(95%Cl 0.73一6.61)。而XRCC1399Gb了Gln基因型携带者的OR=14.12(95%cl