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云南白药(Yunnan Baiyao,YNB)作为我国传统中药,其促进组织愈合,引导骨再生的作用早已为国内外普遍认可并应用于临床。然而云南白药对于牙科治疗,尤其是对牙根发育及其再生过程中的重要种子细胞——根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papillae,SCAPs)增殖分化能力的影响,以及其中作用机制尚不清楚。本文将从以下三个部分就这一问题进行探讨:第一部分云南白药条件培养基的制备和诱导浓度筛选研究目的:制备云南白药条件培养基,筛选最佳诱导浓度,观察其对SCAPs增殖能力的影响。研究方法:碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性检测实验筛选诱导SCAPs矿化的最佳浓度。采用CCK8法(cell counting kit 8,CCK8)法绘制SCAPs生长曲线,以及流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期和凋亡,计算细胞的增殖指数(proliferation index,PI)及细胞凋亡率,检测云南白药条件培养基对SCAPs的增殖能力的影响。实验结果:ALP活性检测结果显示,云南白药条件培养液培养3天和5天时,50 μg/mL组的SCAPs浓度最高(P<0.05)。对该浓度作CCK8和流式细胞术检测,结果显示,对细胞增殖无影响(P>0.05)。结论:50 μg/mL云南白药为最佳诱导浓度,能显著提高细胞矿化能力同时不影响SCAPs的增殖。第二部分云南白药对SCAPs分化能力的影响研究目的:进一步明确云南白药对SCAPs牙/骨向分化能力的影响。研究方法:茜素红染色和10%氯代十六烷基吡啶(cetylpyridinium chloride,CPC)检测两组细胞14天时钙盐沉积情况。提取细胞总RNA和总蛋白,通过实时定量逆转录聚合酶链式反应实验(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测牙向/骨向分化相关标志基因/蛋白(OCN/OCN,OPN/OPN,OSX/OSX,RUNX2/RUNX2,ALP/ALP,COL-I/COL-I,DMP1,DSP/DSPP 等)的表达情况。实验结果:茜素红染色结果显示,云南白药组矿化结节形成能力明显高于对照组。Real-time RT-PCR和Western blot结果显示,实验组牙向/骨向分化相关标志基因/蛋白表达量上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:云南白药能促进根尖牙乳头干细胞的分化。第三部分云南白药调控SCAPs分化的NF-κB通路机制研究目的:探讨核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)通路在云南白药诱导的SCAPs分化过程中的调控作用。研究方法:分别提取胞浆胞核蛋白,Western blot检测相关通路蛋白的表达情况(IκBα,p-IκBα,P65,p-P65)。加入 NF-κB 通路抑制剂(BMS345541),Western blot检测NF-κB信号通路中IκBα,p-IκBα,P65,p-P65表达情况,细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路中IκBα,P65表达情况,检测ALP活性及染色,成牙成骨向分化基因和蛋白的影响。实验结果:NF-κB信号通路P65入核,IκBα降解,p-IKBα,p-P65表达增高。加入NF-κB通路抑制剂(BMS345541)后NF-κκB信号通路P65入核及IκBα降解受到抑制,p-IκBα和p-P65表达降低。云南白药促进SCAPs分化作用被有效逆转。结论:云南白药诱导SCAPs牙向/骨向分化和形态发生,可能是通过激活NF-κB信号通路实现的。