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DNA损伤修复是维护基因组稳定的重要机制。对DNA损伤修复的调控,既可为细胞提供更有力的保护,帮助病原微生物抵御宿主的免疫防御;也可导致细胞易于突变,病原菌易于被宿主清除。分枝杆菌作为一种病原微生物,在人和动物疾病中扮演重要的角色。特别是结核分枝杆菌,每年造成几百万人口的染病,也是引起死亡最多的病种之一。对结核分枝杆菌以及其同属细菌的研究将为了解分枝杆菌在宿主中的存活和增殖提供有力的帮助,并可能产生新的治疗方法。研究表明分枝杆菌非同源末端连接(NHEJ)能够修复DNA双链断裂,帮助结核菌逃脱人体免疫系统的杀菌效应。目前,对分枝杆菌NHEJ的研究尚停留在组成蛋白的发现与功能研究,对其调控方面还是空白。本实验室前期研究结果表明1)去乙酰化酶Sir2蛋白与Ku蛋白有物理相互作用,2)Sir2基因敲除或者过量表达能够影响分枝杆菌NHEJ修复系统的修复效率,但其中的分子机制还不清楚。本研究探讨了NHEJ蛋白Ku的乙酰化修饰以及该修饰对NHEJ修复效率的影响,从功能调控方面理解病原菌DNA修复,将可能为理解结核病菌提供新视角。
本文的主要结论是:
1.结核分枝杆菌和其模式菌株耻垢分枝杆菌的Ku蛋白都具有乙酰化修饰。
2.耻垢分枝杆菌Ku蛋白的第29位赖氨酸(K29)携带乙酰基团,该位点在分枝杆菌属中100%保守。
3.耻垢分枝杆菌Ku蛋白第29位赖氨酸突变为精氨酸(R29),R29蛋白比K29蛋白的体外NHEJ修复效率高。
4.R29蛋白比K29蛋白对dsDNA末端亲和力高。
5.培养环境变化时(双氧水,低pH或者葡萄糖),耻垢分枝杆菌Ku蛋白的乙酰化水平发生变化。
6.耻垢分枝杆菌Sir2基因缺陷时,Ku蛋白的乙酰化水平上升。