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非生物胁迫会严重影响植物的生长发育和产量,并且同时引发一系列的生态、生理、生化和分子等方面的变化。植物经常面对的非生物胁迫包括:高盐、干旱、极端温度和外源激素等,而MYB转录因子在非生物胁迫中有着非常重要的作用,为了研究黄芩中的MYB2,MYB7、MYB8等转录因子如何响应非生物胁迫,本文在已有工作的基础上,对过表达Sb MYB2,Sb MYB7、Sb MYB8转基因烟草进行三种胁迫处理(Na Cl,甘露醇,ABA),并通过对苯丙烷类类成分,生长状态,氧自由基清除酶系统相关酶活性及类黄酮合成途径相关基因等进行分析,其重要研究成果如下:(1)与野生型烟草WT相比较,转Sb MYB2基因烟草中的芦丁含量显著升高,转Sb MYB7基因烟草中的Kaempferol 3-rutinoside-7-glucoside显著升高;除此之外,转Sb MYB2、Sb MYB7基因烟草中的绿原酸含量也比较高,而WT中却未检测出。转Sb MYB8基因烟草中的caffeoylquinic acid dimer和caffeoylquinic acid含量显著高于WT烟草和转空载基因的烟草。说明Sb MYB2、Sb MYB7、Sb MYB8三个基因可能参与到了黄酮类化合物的代谢途径中。(2)为了鉴定Sb MYB2、Sb MYB7以及Sb MYB8基因在非生物胁迫中的功能,分别在烟草中过量表达了Sb MYB2、Sb MYB7以及Sb MYB8。结果表明转基因烟草的根长、鲜重及抗氧化酶活性都显著性升高,表明其能够增强抵抗干旱、高盐、外源激素的能力。(3)转Sb MYB2、Sb MYB7、Sb MYB8基因烟草在逆境胁迫下能快速诱导黄酮类化合物代谢途径相关基因的表达,增加其抗逆能力。(4)Sb MYB8基因能够与Sb CHS基因启动子中的Gm MYB92 BS3元件相结合。(5)从黄芩转录组数据库中共获得了33个Sb WRKY转录因子,并对其核酸序列及编码蛋白特性、系统进化树等做了分析。(6)GA3处理黄芩后,Sb WRKY1、Sb WRKY2、Sb WRKY6、Sb WRKY10、Sb WRKY11、Sb WRKY12、Sb WRKY13、Sb WRKY15、Sb WRKY17、Sb WRKY18、Sb WRKY19、Sb WRKY20、Sb WRKY21、Sb WRKY22、Sb WRKY25、Sb WRKY28、Sb WRKY29、Sb WRKY30、Sb WRKY32、Sb WRKY33表达水平在GA3处理后均显著性下降,而Sb WRKY16在处理后的第1、2h表达水平都显著性上升,Sb WRKY24、Sb WRKY27在处理后的1h表达水平显著上升,表明它们可能响应GA3信号,对下游基因进行调节。选取其中与黄酮代谢途径相关基因表达关系最为密切的Sb WRKY33进行后续分析。(7)亚细胞定位结果表明Sb WRKY33位于细胞核中,与预测结果一致。且转录激活实验证明Sb WRKY33具有转录活性。