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目的:钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)是一种细胞表面蛋白,在参与调节全身钙离子稳态的组织和细胞,例如甲状旁腺、肾脏、骨等组织中广泛表达。然而,CaSR在许多其他不参与调节细胞外钙稳态的组织和细胞中也广泛表达,如脑、皮肤、肺,并且参与调节细胞的多种生理功能,如细胞增殖、分化、凋亡。在肾脏中,CaSR被公认为调节肾小管钙的排泄和吸收。越来越多的证据表明,CaSR不仅在肾小管中分布,在肾小球中也有表达。有研究已证实CaSR在鼠系膜细胞中功能性表达,并且介导鼠系膜细胞增殖。然而,系膜细胞中CaSR活化后引发钙依赖的信号级联通路还不明确。近期研究发现,在一些细胞类型中瞬时受体电位阳离子通道(canonical transient receptor potential channels,TRPC通道)参与CaSR活化诱导的钙内流,如唾液导管细胞、MCF-7乳腺癌细胞、主动脉平滑肌细胞等。本课题探讨TRPC3和TRPC6通道在CaSR活化介导体外培养人肾小球系膜细胞钙信号及细胞增殖中的作用。方法:(1)应用逆转录PCR、Western Blot、免疫荧光染色技术检测系膜细胞中CaSR m RNA和蛋白表达情况。(2)应用Fluo-3/AM对细胞内钙离子染色,通过激光共聚焦显微镜观察CaSR激动剂及TRPC通道阻滞剂等对细胞内钙浓度的影响。(3)应用Real-time PCR、Western Blot技术检测系膜细胞在正常细胞外钙和高浓度细胞外钙条件下TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC6通道的m RNA和蛋白表达变化。(4)应用Brd U细胞增殖ELISA试剂盒测定细胞在正常细胞外钙和高浓度细胞外钙条件下细胞增殖的变化。结果:(1)CaSR在体外培养的人系膜细胞系中表达。(2)CaSR活化诱导系膜细胞内钙释放和TRPC依赖的外钙内流,从而导致细胞内钙浓度增加。(3)CaSR活化选择性上调系膜细胞TRPC3和TRPC6通道m RNA和蛋白表达,而对TRPC1和TRPC4没有影响。(4)TRPC3和TRPC6通道通过钙库不依赖的方式介导CaSR激动剂诱导的外钙内流。(5)TRPC3和TRPC6参与高浓度细胞外钙诱导的细胞增殖。结论:(1)CaSR功能性表达在人系膜细胞系中。(2)CaSR活化能诱导系膜细胞内钙释放及TRPC3和TRPC6通道介导的钙库不依赖的外钙内流。(3)CaSR活化选择性上调TRPC3和TRPC6通道表达。(4)TRPC3和TRPC6通道参与CaSR活化诱导的系膜细胞增殖。