论文部分内容阅读
“君臣佐使”配伍结构是方剂配伍规律的重要组成部分,而君药在方中占主导地位。因此,对君药的研究是对方剂配伍结构研究的重点,为进一步研究方剂配伍规律揭示复方复杂而深奥的科学内涵提供依据。 目的: 在体实验采用小鼠耐缺氧的方法,通过对耐缺氧时间的检测,比较通脉养心丸君药与去君药对小鼠耐缺氧能力的影响;体外实验建立H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤模型,通过对抗氧化酶活性、脂质过氧化产物含量、细胞内及线粒体内Ca2+的浓度及线粒体凋亡通路的检测,比较通脉养心丸君药与去君药抗氧化作用。 方法: 1采用小鼠耐缺氧的方法,通过对小鼠耐缺氧时间的检测,比较通脉养心丸君药与去君药对小鼠耐缺氧能力的影响。 2.建立H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤模型。 2.1.通过对心肌细胞活力(MTT法)、乳酸脱氢酶的释放量(LDH,荧光标记法)、细胞内活性氧含量(ROS,CMH2DCFH-DA荧光探针法)、超氧化物歧化酶活力(SOD,试剂盒)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-Px,试剂盒)、谷胱甘肽活力(GSH,试剂盒)和丙二醛含量(MDA,试剂盒)的检测,比较通脉养心丸君药与去君药对大鼠H9c2心肌细胞的抗氧化能力。 2.2.通过对细胞内Ca2+的浓度(Fluo4-AM荧光探针法)、线粒体内Ca2+的浓度(Rhod2-AM荧光探针法)、抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax的表达(Western-blot)、线粒体膜通透性转换孔的开放程度(mPTP,Calcein-AM荧光探针)、细胞色素c的表达(Cty-c,Western-blot)、线粒体膜电位水平(ΔΨm,JC-1荧光探针法)、Caspase-9和Caspase-3活性(荧光法)及细胞凋亡率(细胞流式术)的检测,比较通脉养心丸君药与去君药对大鼠H9c2心肌细胞线粒体凋亡通路的影响。 通过上述实验,探讨通脉养心丸君药与去君药基于抗氧化作用的比较研究。 结果: 1、通脉养心丸君药组、去君药组和全方组能够不同程度的提高小鼠耐缺氧时间,其中以通脉养心丸全方组效果最佳,君药组次之,并且君药组显著优于去君药组。 2、确定了H2O2诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的浓度为200μM,作用两小时。 2.1.通脉养心丸君药组、去君药组和全方组均能够不同程度抑制H2O2损伤后H9c2心肌细胞活力的下降及 LDH的释放,能够不同程度的抑制胞浆ROS增多、抗氧化酶(SOD、GSH、GSH-Px)活力的下降和MDA含量增加。提示,通脉养心丸君药组、去君药组和全方组能够不同程度的提高大鼠H9c2心肌细胞的抗氧化能力,其中,通脉养心丸全方组作用最为明显,君药组次之,且君药组明显优于去君药组。 2.2.通脉养心丸君药组、去君药组和全方组能够不同程度的降低细胞内和线粒体内Ca2+的浓度、提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抑制促凋亡蛋白Bax的表达、抑制mPTP的开放、减少细胞色素c的释放、抑制线粒体膜电位的下降、降低Caspase-9及Caspase-3的活性,最终减少细胞凋亡率。提示,通脉养心丸君药组、去君药组和全方组能够不同程度的抑制大鼠H9c2心肌细胞线粒体凋亡通路,其中,通脉养心丸全方组作用最为明显,君药组次之,且君药组明显优于去君药组。 上述实验结果表明,在提高抗氧化作用方面,全方组效果最佳,君药组次之,并且君药组明显优于去君药组。 结论: 通脉养心丸君药组、去君药组和全方组均能够不同程度的提高小鼠耐缺氧能力,并且能够不同程度的提高大鼠H9c2心肌细胞抗氧化酶活力、降低脂质过氧化产物含量、降低细胞内及线粒体内Ca2+的浓度及线粒体凋亡通路,共同起到抗氧化的作用,其中,全方组作用最佳,通脉养心丸君药组明显优于去君药组。提示,通脉养心丸君药在全方中起到了主导作用,为进一步研究通脉养心丸配伍规律提供了理论依据。