瓜蒌有效成分提取分离及对猪源链球菌抑菌活性测定

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猪源链球菌是一种常见的人畜共患传染病菌,目前,由于猪源链球菌血清型较多,所以其引发的疾病主要依赖于抗生素的治疗,且由于临床上对抗生素的不合理使用及菌株间的水平传播等因素,导致猪源链球菌出现耐药性,且多重耐药情况严重,这不仅给控制和治疗疾病带来困难,而且加剧了抗生素在动物肉制品和乳制品中的残留,严重的危害动物食品安全,且容易使耐药基因通过食品转移到人而使人类疾病治疗成为棘手的问题。为此,本实验采用药理实验方法、中草药提取纯化方法,筛选出能抑制猪源链球菌的中草药及其有效成分,并将其与抗生素一同使用,既可以体现中草药固有的长效、广谱的抗菌作用,又可以突出抗生素药效快、作用明显的特点。本实验从以下几个方面进行:1.猪源链球菌中草药抑制剂的筛选分别采用水煎法及醇提法制备了二十味中草药提取物,以临床分离的1株猪源多重耐药链球菌为受试菌,用棋盘法筛选出瓜蒌醇提物、乌梅醇提物、乌梅水提物与环丙沙星联合应用后对猪源多重耐药链球菌具有相加抑菌作用。2.瓜蒌正丁醇萃取物对猪源链球菌活性成分追踪石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得瓜蒌萃取相浸膏,并测定其对猪源链球菌Pf的最低抑菌浓度(MIC),筛选得到能够提高细菌对环丙沙星敏感性的提取物,最后得出正丁醇萃取物与环丙沙星联用的部分抑菌浓度(FIC)为1,表现为相加抑菌作用。采用硅胶柱层析与薄层层析相结合,利用硅胶柱色谱,凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)等手段分离纯化瓜蒌正丁醇萃取物活性成分,最后得到纯净的馏分Fr.349~371,通过核磁共振仪检测,根据理化性质和图谱数据对其进行分析,初步判断为脂肪酸类成分。3.瓜蒌中皂苷类化合物等有效成分的研究冷凝回流提取法提取得瓜蒌醇提物,浸膏水悬液过聚酰胺树脂柱、大孔树脂柱得不同浓度乙醇的洗脱液,进行含量测定,得瓜蒌黄酮类物质、皂苷类物质。通过中西药联合药敏试验确定环丙沙星与瓜蒌有效部位对猪源链球菌Pf-cc的最低抑菌浓度(MIC),结果显示,聚酰胺10%、70%乙醇洗脱物以及大孔树脂10%、70%、95%乙醇洗脱物对猪源链球菌均有抑菌活性,其中聚酰胺10%乙醇的洗脱物与环丙沙星联用的FIC值为1,表现为相加抑菌作用。
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