【摘 要】
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生物治理是苏打盐碱土治理的有效方法。紫花苜蓿具有较强的抗盐碱能力,发掘其抗盐碱基因并对其潜在抗性机理进行阐释,有利于高抗碱性紫花苜蓿新品种的培育和在盐碱地生物治理中的综合利用。AP2/ERFs转录因子家族是一类与盐碱调控密切相关的转录因子,在植物的生长发育、代谢、胁迫应答、信号传导等诸多功能方面发挥着重要作用。对紫花苜蓿中这类转录因子的研究,将有助于揭示并阐释紫花苜蓿的抗盐碱机理,提供优异的抗盐碱
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生物治理是苏打盐碱土治理的有效方法。紫花苜蓿具有较强的抗盐碱能力,发掘其抗盐碱基因并对其潜在抗性机理进行阐释,有利于高抗碱性紫花苜蓿新品种的培育和在盐碱地生物治理中的综合利用。AP2/ERFs转录因子家族是一类与盐碱调控密切相关的转录因子,在植物的生长发育、代谢、胁迫应答、信号传导等诸多功能方面发挥着重要作用。对紫花苜蓿中这类转录因子的研究,将有助于揭示并阐释紫花苜蓿的抗盐碱机理,提供优异的抗盐碱基因,用于作物的抗盐碱育种。本研究克隆了紫花苜蓿MsERF003基因。该基因拥有长度为570bp的开放阅读框,编码190个氨基酸残基。该基因与来自蒺藜苜蓿MtERF003同源基因同源性为98.84%。通过qPCR法对其在碳酸盐胁迫下的表达模式进行了分析,发现该基因在各个器官中的表达量均有上调,在根和茎中上调尤为明显。我们构建了MtERF003启动子驱动的GUS基因表达载体,转入烟草中,获得了转基因植株。GUS染色分析表明,该基因的启动子为在烟草中是根特异性表达启动子,且只在碳酸盐胁迫下发挥作用。我们构建了过MsERF003-GFP融合表达载体,通过瞬时表达对其亚细胞定位进行了分析。结果表明MsERF003只定位于在细胞核中。我们构建了MsERF003基因植物表达载体,并导入到烟草基因组中,获得了转基因植株,且对T1代植株进行抗盐碱性评估。结果表明在1.2%碳酸盐处理的8天后,非转基因植株已经萎蔫枯黄,而转基因植株则长势良好;在处理的过程中,转基因植株的总糖含量、脯氨酸含量、CAT含量、APX含量、POD含量和Na~+/K~+比显著高于非转基因组,对照组丙二醛含量的显著高于转基因组,叶绿素含量的降解速度明显快于转基因组;抗逆响应基因表达分析表明,在处理后期转基因植株的抗逆效应基因的表达量都高于对照组。以上数据表明MsERF003基因在在烟草中表达提高了转基因烟草的抗盐碱能力,其可能在紫花苜蓿抗盐碱响应中起着重要的作用。
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