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目的:通过绘制COHb和Hb的吸收光谱和一阶导数光谱,研究一氧化碳血红蛋白的导数光谱特性,并建立临床血液样品中一氧化碳血红蛋白的导数定量测定方法。方法:通过在血红蛋白溶液通入CO气可制备饱和COHb溶液,通入O2气后再加入Na2S2O4可制备饱和Hb溶液,以两饱和溶液作为测定COHb的相对标准溶液。采用日本岛津UV-265紫外-可见分光光度计获取样品的吸收光谱和导数光谱。结果:吸收光谱曲线表明,COHb的最大吸收波长在420nm左右,Hb的最大吸收波长在430 nm左右,两组分的光谱重叠十分严重,采用普通光谱分析方法难以对血液中COHb进行定量测定。通过绘制COHb和Hb的导数光谱,并利用导数光谱零交技术消除Hb干扰,发现在波长427nm的导数光谱值可应用于定量测定血液中一氧化碳血红蛋白。该方法可有效地消除Hb和基底物质的干扰,在COHb含量为0%～100%范围内具有优良的线性关系,对COHb>5%的样品,与双波长分光光度法测定结果具有良好的可比性。初步的临床应用表明导数光谱分析结果具有较好的精密度(cv≤3.11%)