我国中华白蛉的鉴别和分子群体遗传结构研究

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中华白蛉(Phlebotomus chinensis Newstead,1843)隶属毛蠓科(Psychodidae)、白蛉亚科(Phlebotominae)、白蛉属(Phlebotomus)。中华白蛉在我国的分布广泛,是其分布区利什曼病的重要传播媒介。多年的研究证实中华白蛉在不同地理分布区,其形态特征、生态习性和传病能力存在一定差异,具有相当的复杂性,部分地区其分类地位存疑多年。有鉴于此,深入探讨中华白蛉的分类地位和群体遗传结构具有重要意义。本课题的研究策略如下:首先,在我国中华白蛉的分布地,广泛收集样本;然后,应用形态特征与分子特征相结合的方法,对应分类鉴别中华白蛉及其他蛉种,并探讨中华白蛉的分类地位;其次,筛选中华白蛉具有多态性的微卫星DNA位点,描述其基本特征;再者,应用mtDNA-Cytb基因和多态微卫星DNA位点两个分子标志,阐明我国中华白蛉不同群体间的基因交流、基因渐渗、遗传差异程度以及群体分化等问题,并分析影响群体遗传结构的主要因素。取得如下主要结果:1.本研究获得我国河南、陕西、四川和甘肃4省6个地点的中华白蛉样本,涵盖不同的地理环境、生态习性、海拔高度和疾病流行区。采集获得模式产地(四川九寨沟,海拔2000m以上)的四川白蛉,以及新疆的吴氏白蛉和长管白蛉。2.检视了来自不同采集地中华白蛉132只、四川白蛉26只、吴氏白蛉29只,以及长管白蛉23只。吴氏白蛉和长管白蛉具有典型的形态鉴别特征,而中华白蛉与四川白蛉的差异主要体现在翅长,及其雄蛉与雌蛉的翅长度比例。3.对应形态鉴别确认的中华白蛉、四川白蛉和吴氏白蛉,单蛉抽提基因组DNA,扩增和测定rDNA-ITS2和mtDNA-Cytb序列。序列比对结果显示,ITS2序列在中华白蛉、四川白蛉和吴氏白蛉种间缺乏解析度,Cytb序列的种间解析度比ITS2理想。中华白蛉与四川白蛉的分子特征已具有一定明显差别,且中华白蛉种内也出现遗传分化。提示目前将四川白蛉暂列为独立种较为合理,四川白蛉与中华白蛉的亲缘关系非常近,四川白蛉应处于独立种的分化中(speciation)。4.在已测定的中华白蛉微卫星DNA的154个阳性克隆序列中,获得有效的微卫星DNA序列共118条。在此基础上,选择了22个位点进行多态性筛选,共获得了多态的微卫星DNA位点14个。同时,对其中的10个位点做了基因扫描,描述了各位点的基本特征。5.应用mtDNA-Cytb基因和10个微卫星DNA位点研究了中华白蛉的群体遗传结构,两种分子标志的研究结果均显示:来自河南群体的中华白蛉遗传分化程度最高,陕西的两个群体间FST为负值,其间差异极小,总体趋势是基因流水平随着地理距离的增大而减小,群体遗传分布格局符合距离隔离模型。但基于Cytb基因序列的结果显示基因流水平为0.0594,群体间分化水平高,其间遗传差异程度与地理距离密切相关;基于微卫星DNA的结果是群体间分化水平低,基因流为6.599,其间遗传差异程度与种的分化密切相关,也与地理距离存在一定相关性。导致上述差异的原因是两种分子标志本身的特点和进化速率不同,也与Cytb基因序列的样本量较少有一定关系。综合判断,微卫星位点的结果应较为符合实际情况。
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