猪链球菌长链突变体的构建及抗吞噬作用研究

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细菌形态具有多样性,体现在细胞的几何形状、大小以及菌毛等附加物的不同布局。细菌形态的可塑性是细菌逃逸和对抗宿主防御反应而采取的生存策略之一。大肠杆菌的细胞体积增大有助于其对抗环境的压力,抵抗宿主细胞的吞噬作用,产生对抗生素的抗性以及细菌感染宿主时在体内的持留。丝状的嗜肺军团菌能够侵入肺上皮细胞并在其中增殖,表明这种形态类型具有侵入的潜力。肺炎链球菌的形态异质性可增强该菌与上皮表面的黏附力,从而促进其在上呼吸道定植。肺炎链球菌的链长与其致病性相关,链越长,抗吞噬能力越弱,致病性越低。猪链球菌是链球菌属的主要成员之一,为兼性厌氧的革兰氏阳性卵圆球菌或球菌,是重要的人畜共患病原菌。猪链球菌强毒株一般由3-5个细胞形成短链状,但其细胞形态与致病性之间关系还是未知。本研究构建了猪链球菌转座子突变体库,从中筛选出39株长链突变体和33株正常链长突变体,在基因水平上研究了猪链球菌链长形成机制,鉴定了一些链长相关基因,并通过调理吞噬实验研究了猪链球菌链长与抗吞噬作用之间的关系。主要结果如下:1.猪链球菌链长突变体库的构建用含有Tn917转座子的温敏型质粒构建了猪链球菌转座子突变体库,与其他研究生一起构建了共计1918株突变体。通过全基因组测序确定了1724株突变体的插入突变基因。通过革兰氏染色和光镜下的链长测定,从900株突变体中筛选出39株链长显著增加的突变体和33株正常链长的突变体。2.猪链球菌链长相关基因的鉴定根据突变体插入突变基因的注释,将获得的猪链球菌链长相关的基因功能进行了分类,发现这些基因参与细菌的物质代谢和转运、DNA复制与修复以及转录和翻译等过程。同时发现13个长链突变体的转座子插入位点位于基因间隔区,可能是通过影响上下游基因的功能来调节猪链球菌的链长。3.猪链球菌的链长和抗吞噬作用之间的关系用猪中性粒细胞的调理吞噬实验,将突变体的存活率与其亲本菌株SC-19的存活率进行比较,发现55.56%长链突变体抗吞噬能力增强,而只有27.28%的长链突变体的抗吞噬能力减弱。同时,70%的正常链长突变体抗吞噬能力也减弱。这些结果与肺炎链球菌的链长增加而抗吞噬能力减弱的结论不完全一致,表明猪链球菌转座突变体的抗吞噬能力不仅与链长有关,可能还与其突变基因的功能密切相关。
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