中药炮制与复方配伍是中医临床用药的两大特色,中药材必需经过加工炮制成中药饮片后方可入药,而中药复方是在中医药理论指导下由中药饮片配伍组成,因此在中医复方中研究中药炮制更为符合临床实际^[1-2]。姜是临床最常用的中药之一,其临床常见炮制品有生姜、干姜和炮姜等,虽同一来源,但用途各异。前人对姜炮制品药性药效有“生姜走而不守,干姜能走能守,炮姜守而不走”的精辟概述,可见姜的不同炮制品其功效亦不同。课题组前期研究表明姜的不同炮制品其姜酚类成分及药效作用差异明显,炮制引起的成分改变可能是造成临床功效差异的主要原因之一^[3-4]。中医临床多以复方用药,单味药材炮制变化的研究结果只能部分反映实际情况,将炮制品纳入复方中研究,即在复方中对炮制机理进行进一步深入研究,更为符合中医临床用药特点。苓甘五味姜辛汤载于《金匮要略》,方中干姜为君药,取其温中回阳、温肺化饮之效^[5]。从姜的炮制品功效来看,生姜擅长解表止呕、干姜擅长温中散寒,炮姜擅长温经止血,姜的不同炮制品对该方功效的影响及作用机制是值得探讨的问题。目的:本实验在课题组前期研究的基础上,采用“卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）+冰水浴”建立寒饮伏肺型哮喘大鼠模型,分析比较苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤对寒饮伏肺型哮喘大鼠的药效作用及对寒饮伏肺型哮喘大鼠血清、尿液差异性代谢物的调节作用;从药效学及代谢组学视角下探讨中药复方苓甘五味姜辛汤中姜炮制的科学性及合理性,为姜炮制机制研究提供理论基础,为临床上合理选用姜炮制品提供依据。方法:1.将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤组、阳性药桂龙咳喘宁组,每组8只,共48只。除空白对照组外,其他各组均采用“OVA+冰水浴”法建立寒饮伏肺型哮喘大鼠模型,通过对大鼠一般形态学观察、体重、脏器指数变化、大鼠肺组织病理HE染色、肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）嗜酸性粒细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞计数及血清中炎性因子IgE、IL-4、IFN-γ含量来评价寒饮伏肺型哮喘大鼠模型及苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤对其药效作用差异。2.采用气相色谱-质谱联用（Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术测定各组大鼠血清、尿液代谢物;建立主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）、正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）等多元统计模型,通过变量重要性投影（VIP,VIP>1）和T检验（p<0.05）筛选空白对照组与寒饮伏肺型哮喘模型组血清、尿液差异性代谢物,与NIST库比对（Match>700）,查阅文献,最终确定差异性代谢物;应用Metaboanalysis数据库构建差异性代谢物的代谢通路;药效指标与差异性代谢物进行皮尔逊相关性分析,以热图呈现。3.GC-MS测定各组大鼠血清及尿液代谢物,通过正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）统计模型,获得变量重要性投影（VIP）,VIP>1及T检验（p<0.05）分别筛选寒饮伏肺型哮喘模型组与苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤组血清、尿液差异性代谢物,与NIST库比对（Match>700）,最终确定苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤对差异性代谢物的作用,探讨苓甘五味姜辛汤复方中姜的炮制对寒饮伏肺型哮喘的作用机制。结果:1.“OVA+冰水浴”方法造模后,大鼠出现饮水、摄食量减退,体重减轻,打喷嚏,爪肿胀,毛发晦暗,部分大鼠出现哮鸣音等一系列类似中医“寒饮伏肺哮喘”状态。与空白对照组相比,模型组大鼠肺组织HE染色发生显著改变:支气管壁增厚,支气管周围炎性细胞浸润,管腔狭窄且有粘液栓形成;BALF中嗜酸性粒细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞数量显著增加（P<0.01）;血清中IgE、IL-4水平显著增加（P<0.01）,IFN-γ水平显著下降（P<0.01）;模型组大鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏指数有显著差异（P<0.05或P<0.01）。苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤及桂龙咳喘宁干预后,大鼠肺组织病理明显改善:各给药组未见明显粘液栓,支气管壁变薄,支气管周围炎性细胞浸润减少,管腔空隙狭窄改善;BALF炎性细胞计数、血清IgE,IL-4,IFN-γ水平、心脏,肝脏,脾脏,肺脏指数均出现向空白对照组回调趋势。2.最终筛选得到15种与寒饮伏肺型哮喘有关的血清差异性代谢物,与空白对照组相比,血清中乳酸、十七烷、D-（-）塔罗糖、软脂酸明显升高（P<0.05）;甘油、甘氨酸、磷酸（3:1）、D-松醇、D-甘露醇、D-半乳糖、D-葡萄糖、吡喃葡萄糖、肌醇、硬脂酸、乳糖显著下降（P<0.05）。筛选得到22种与寒饮伏肺型哮喘相关的尿液差异性代谢物,与空白对照组相比,尿液中苯甲酸、丁二酸、己二酸、β-d-吡喃葡萄糖、柠檬酸水平显著上调（P<0.05）;磷酸（3:1）,3,4-二羟基丁酸、L-苏糖酸、D-（+）阿拉伯醇、L-果糖、戊二酸、核糖酸、苯乙酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、葡萄糖二酸、肌醇、L-抗坏血酸、葡糖苷酸、D-乳糖、麦芽糖、D-（+）纤维二糖水平下调（P<0.05）。主要涉及的代谢通路包括:淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢、柠檬酸代谢、乙醛酸二羧酸代谢、甘油磷脂代谢、甘氨酸,丝氨酸,苏氨酸代谢、肌醇磷酸代谢。主要涉及与能量代谢、氧化应激相关的代谢物及代谢通路。3.苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤干预后,与模型组相比,血清中乳酸、甘氨酸、磷酸、十七烷、d-半乳糖、d-葡萄糖、吡喃葡萄糖、肌醇、软脂酸、硬脂酸;尿液中苯甲酸、丁二酸、L（-）-果糖、戊二酸、核糖酸、苯乙酸、柠檬酸、L-抗坏血酸、d-乳糖、麦芽糖等均有不同程度的回调,尤以苓甘五味（干）姜辛汤调节效果最佳。说明苓甘五味姜辛汤中姜炮制成干姜后入药对寒饮伏肺型哮喘大鼠异常代谢状态的改善效果最好。结论:“OVA+冰水浴”可成功构建大鼠寒饮伏肺型哮喘模型,寒饮伏肺型哮喘大鼠出现基础代谢率降低及炎症反应。此外,寒饮伏肺型哮喘模型组大鼠血清及尿液中多种代谢物紊乱亦提示其体内代谢出现异常。给药苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤可改善寒饮伏肺型哮喘大鼠的相关药效学指标及回调血清、尿液中的潜在生物标志物,表明苓甘五味（生/干/炮）姜辛汤具有调节寒饮伏肺型哮喘代谢异常的作用。其中苓甘五味（干）姜辛汤效果最优,这可能与姜炮制成干姜后其温热之性增强有关,说明苓甘五味姜辛汤方中姜炮制成干姜入药治疗寒饮伏肺型哮喘更为合理,与临床一致。推测其炮制机制可能通过影响淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢、柠檬酸代谢、乙醛酸二羧酸代谢、甘油磷脂代谢、甘氨酸,丝氨酸,苏氨酸代谢、肌醇磷酸代谢等通路,从能量代谢及氧化应激等方面发挥作用。