本研究构建了绵羊体细胞-绵羊卵母细胞重组胚、骆驼体细胞-绵羊卵母细胞重组胚和骆驼体细胞-牛卵母细胞重组胚三种重组胚,并研究了它们早期的发育情况。首先用不同的方法体外培养骆驼和绵羊皮肤成纤维细胞,作为核供体,然后体外成熟牛和绵羊的卵母细胞作为受体,最后构建重组胚。 研究表明,37℃、5%CO2、饱和湿度下,10%NCS 的 DMEM-F12 培养液适宜于骆驼皮肤成纤维细胞体外生长,小组织块直接培养法可获得骆驼皮肤成纤维细胞,本实验对比了三种方法并找到最佳方法;传代培养时,酶消化法和反复贴壁法可分离纯化骆驼皮肤成纤维细胞,用 D-Hanks 为缓冲液配制的胰蛋白酶适合骆驼皮肤成纤维细胞的消化。 本研究发现,用离子霉素联合 6-DMAP 能有效地激活牛和绵羊的卵母细胞,然后以 10%FBS+SOFaa+颗粒细胞为发育微环境培养,其囊胚率分别为 27.34%和 46.08%;成熟卵母细胞在不同激活电压下进行激活,脉冲时间为 20 μsec 二次,间隔 0.5 秒,再用 6-DMAP 辅助激活 4h 后,置于 SOFaa+10%FBS+颗粒细胞的微环境中培养。当电压从 1000V/cm 到 2400V/cm 之间激活牛卵母细胞时,均可获得囊胚,但只有电压在1400V/cm 附近时,才可以使得囊胚率最高。当电压从 1000V/cm 到 2200V/cm 之间激活绵羊卵母细胞时,均可获得囊胚,但只有电压在 1400V/cm 附近时,才可以使得囊胚率最高。 带下注射结合电融合能获得融合的重构胚。绵羊体细胞与绵羊卵母细胞构建重组胚可以发育到囊胚期;骆驼体细胞与绵羊卵母细胞构建重组胚可以发育到桑葚胚时期;而骆驼体细胞与牛卵母细胞构建重组胚可以发育到 8-16 细胞胚胎时期。