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目的:观察金水清对MsPGN湿热证血尿大鼠血清、肾脏组织中TGF-β1、NF-κB表达水平的影响,探讨金水清防治此模型的作用机制,同时拟部分动态观察大鼠尿液、生化、病理及炎性因子变化及其关系,初步探索此模型的发生发展规律,为临床治疗血尿提供依据。方法:将75只SPF级别健康雄性SD大鼠(3周龄)随机分为5组即正常组、模型组(模一组、模二组)、治疗组(金早组、金晚组),每组15只。模一组在口服、尾静脉注射牛血清白蛋白(BSA)和尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)的基础上,复加湿热环境和高糖高脂饮食,制备MsPGN湿热证血尿大鼠模型。模二组、金早组和金晚组均在模一组的基础上将尾静脉注射SEB改为皮下注射四氯化碳(CCL4)和尾静脉注射脂多糖(LPS)。金早组、金晚组分别于造模第7周、9周开始灌服金水清,每日一次,至12周末。正常组每日给予等量酸化水灌服,至12周末。观察各组大鼠的一般情况。每周收集尿液,并在实验单数周测定尿红细胞个数,双数周测定24小时尿蛋白定量。实验第8、10、12周末处死大鼠,每组各5只,并检测血生化,光学显微镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,酶联免疫吸附测定法、免疫组化法分别检测血清、肾组织中TGF-β1、NF-κB的含量。结果:1.一般情况:正常组大鼠在实验过程中精神状态、活动、反应性、体重等均无明显异常;模型组和治疗组大鼠造模期间均出现倦怠嗜卧、毛发脱落、进食减少、体重减轻、小便短赤、大便稀烂、舌质暗红,但程度各不相等,甚则部分出现皮下水肿、肛门红肿等湿热症状;模一、二组湿热症状无明显差异;各治疗组大鼠上述湿热症状均有不同程度的改善,以金早组改善湿热症状最为显著。2.尿红细胞、尿蛋白测定:正常组大鼠在实验期间无或出现极少量血尿、蛋白尿;各模型组大鼠于造模6周、8周后均出现程度不等的血尿、蛋白尿,其中各模型组第8周可见血尿和少量蛋白尿(24Hupro>10mg),第10周可见血尿和大量蛋白尿(24Hupro>50mg),与正常组比较有统计学意义(P<0.05);模一组与模二组血尿比较无统计学意义(P>0.05)、蛋白尿比较有统计学意义(P<0.05);各治疗组血尿、蛋白尿逐渐减少,与模二组比较有统计学意义(P<0.05),第12周金早组与模二组比较有显著统计学意义(P<0.01)、金早组与金晚组比较有统计学意义(P<0.05)。3.肾功能检测:造模期间各模型组、治疗组尿素氮、肌酐均较正常组升高,比较无统计学意义(P>0.05)。4.血脂检测:各模型组血清总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)显著升高,与正常组比较有显著统计学意义(P<0.01);模一组与模二组比较无统计学意义(P>0.05);各治疗组CHOL、TG的含量降低,第12周金早组与模二组比较有统计学意义(P<0.05)、金晚组与模二组比较无统计学意义(P>0.05)。5.酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测:模型组血清TGF-β1、NF-κB表达水平明显升高,与正常组比较,前者实验第8周无统计学意义(P>0.05)、后者比较有统计学意义(P<0.05),实验第10周、12周比较均有统计学意义(P<0.05);模二组与模一组比较无统计学意义(P>0.05);各治疗组TGF-β1、NF-κB表达水平降低,第12周金早组与模二组比较有统计学意义(P<0.05)、金晚组与模二组比较无统计学意义(P>0.05);第12周金早组与金晚组血清NF-κB比较有统计学意义(P<0.05)、TGF-β1比较无统计学意义(P>0.05)。6.免疫组化法检测:正常组大鼠肾小球、肾小管中无或偶有轻微TGF-β1、NF-κB棕色阳性表达;各模型组大鼠肾脏组织中TGF-β1、NF-κB有较强的表达,棕色阳性主要分布于系膜区、肾小管上皮细胞等部位;各治疗组大鼠亦均有阳性表达,部位同模型组,但程度均有所减轻。Image图象分析检测其OD值显示:各模型组与正常组比较OD值升高,实验第8周TGF-β1OD值无统计学意义(P>0.05)、NF-κB OD值有统计学意义(P<0.05),第10周、12周两者均有统计学意义(P<0.05);模一组与模二组比较无统计学意义(P>0.05);各治疗组与模二组比较OD值均降低,第12周金早组与模二组两者比较均有统计学意义(P<0.05),金晚组与模二组比较无统计学意义(P>0.05),金早组与金晚组比较无统计学意义(P>0.05)。7.光镜下可见:正常组肾脏组织无系膜细胞增生、细胞外基质聚集,毛细血管襻开放良好,肾小球形态正常,肾小管结构规则,肾间质无炎症细胞浸润;各模型组均出现系膜细胞、系膜基质明显增生,弥漫性肾小球系膜区增宽呈分叶状,部分肾小球可见萎缩,毛细血管管腔非常狭窄甚则闭塞,肾间质有大量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞肿胀变性甚则脱落,肾小管管腔亦有闭塞,且在实验第8周、10周、12周逐渐加重,模一组与模二组比较未见显著差异;金早组肾小球系膜细胞、细胞外基质轻度增生,肾小球无萎缩,毛细血管管腔轻度狭窄,肾小管上皮细胞偶变性肿胀,间质轻度炎性细胞浸润,在实验12周改善明显;金晚组肾小球系膜细胞、细胞外基质轻中度增生,肾小球偶见萎缩,毛细血管管腔轻中度狭窄,肾小管上皮细胞变性肿胀,肾小管管腔偶见闭塞,间质轻中度炎性细胞浸润,实验第12周改善无金早组明显。结论:根据中医湿热证的病因病理学理论,采用综合因素,成功地建立更经济、更实用的系膜增生性肾炎湿热证血尿大鼠模型;金水清可明显改善系膜增生性肾炎湿热证血尿大鼠的湿热症状,并通过下调早期炎症标志性因子NF-κB、肾脏纤维化因子TGFβ1的表达,从而减少肾脏炎症免疫反应和促纤维因子的合成、减轻MC增生和ECM聚集,减少血尿、蛋白尿及改善血脂紊乱,从而达到防治MsPGN疾病进展的目的,值得临床进一步推广使用。大鼠血尿、蛋白尿在实验第8周、10周与其生化、病理、NF-κB、TGF-β1的变化相一致,这可能是此模型发展过程中的关键时间点,对血尿的临床治疗意义重大。