目的:1、研究胰岛素对高糖培养的巨噬细胞和II型糖尿病大鼠皮肤烫伤创面巨噬细胞NLRP3炎症体活化的影响2、高糖环境下自噬与NLRP3炎症体活化间的关系3、胰岛素通过激活自噬抑制炎症体活性的机制探索方法:1、人单核细胞细胞系,THP-1细胞,经LPS诱导分化为巨噬细胞;提取大鼠原代腹腔巨噬细胞;分别观察上述细胞在正常糖(normal glucose,NG)和高糖(high glucose,HG)环境下NLRP3炎症体成分NLRP3、ASC、Caspase1和炎症相关因子的m RNA和蛋白表达,以及胰岛素对高糖环境中炎症体活性的影响。2、使用6～8周雄性Wistar大鼠,高脂饮食喂养联合小剂量链脲菌素(Streptozotocin,STZ)多次腹腔注射诱导成为II型糖尿病大鼠。在其背部制作30%TBSA(total body surface area)的深II度烫伤创面。应用随机数字表法将大鼠随机分为对照组(Ctrl)和胰岛素组(Ins),分别在创面的皮下浸润注射2ml生理盐水和稀释于等体积生理盐水中的胰岛素,在伤后第5天和第12天取两组大鼠创面皮肤组织,观察局部运用胰岛素对创面NLRP3炎症体成分表达水平的影响(western blot、免疫荧光),及创面中相关细胞因子的表达。3、在LPS诱导的THP-1细胞中,观察高糖及胰岛素存在情况下自噬水平变化,检测自噬相关蛋白LC3II/I、P62的表达(western blot);分别加入自噬抑制剂氯喹和诱导剂雷帕霉素,探索高糖环境中自噬和NLRP3炎症体的关系以及胰岛素对自噬的影响。4、检测高糖及胰岛素存在情况下p-AKT、自噬相关基因Atg7,Vps34等的表达,探讨胰岛素对自噬的调控机制。结果:1、在LPS诱导的THP-1细胞和腹腔提取的原代巨噬细胞中,均观察到高糖组NLRP3炎症体的表达水平明显高于正常糖浓度组,促炎因子表达升高、抑炎因子水平降低,而在高糖+胰岛素组NLRP3炎症体活化水平则明显下调。2、糖尿病大鼠烫伤烫伤后第5天、第12天,胰岛素应用创面中NLRP3炎症体活化水平明显低于生理盐水应用创面,创面炎症因子IL-1β表达降低,愈合相关因子Arg1、IL-10水平升高。3、高糖环境下自噬受损,炎症体活化水平升高;胰岛素可以增强自噬,降低炎症体水平;使用自噬抑制剂氯喹拮抗胰岛素的促自噬作用,炎症体水平较无自噬抑制剂组升高。4.高糖+胰岛素组中,p-AKT、Atg-7、Vps34表达与单纯高糖组相比明显升高,而这一现象可被PI3K/AKT抑制剂LY294002所抑制,同时自噬水平降低。结论:1、高糖诱导THP-1细胞和原代巨噬细胞NLRP3炎症体活化,胰岛素可抑制高糖诱导的NLRP3炎症体活化水平。2、局部运用胰岛素抑制II型糖尿病大鼠烫伤创面NLRP3炎症体活化、降低创面炎症反应程度。3、胰岛素可能通过上调p-AKT水平,增加自噬相关基因Vps34、Atg7的表达进而促进自噬,加速炎症体的清除,从而降低炎症体活化水平。