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弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤亚型。尽管目前R-CHOP方案已使DLBCL预后明显改善,但仍有30%患者经过常规治疗后耐药或复发,这类患者治疗手段有限且疗效差。越来越多的证据证实宿主T细胞免疫有望用于治疗难治及复发B细胞淋巴瘤,CAT-T细胞和免疫检查点抑制剂已获良效,但致命性副作用如细胞因子风暴和脱靶效应影响了其应用,免疫治疗需要更加特异性。CXCR5+CD8+T细胞是新发现的T淋巴细胞亚群,慢性病毒感染研究提示其对病毒有高杀伤作用。CXCR5唯一已知配体为CXCL13,表达于B淋巴细胞滤泡,CXCR5+CD8+ T细胞与B细胞肿瘤相互作用的能力可能更强。本项研究初步探索了 CXCR5+CD8+ T淋巴细胞在弥漫大B细胞淋巴瘤中的肿瘤免疫效应,验证其是否有DLBCL细胞免疫治疗的潜力。本研究结果发现,在健康对照人群中,T淋巴细胞中CXCR5+CD8+T细胞所占的比例通常小于1%,然而在DLBCL患者中,CXCR5+CD8+T细胞亚群的比例显著升高(0.11～0.51%0.18～3.25%,p=0.0031),CD8+T 细胞中 CXCR5+CD8+T 细胞比例也较高(0.38～1.72%vs 0.62～14.38%,p=0.0044)。提示 DLBCL 患者中CXCR5+CD8+ T细胞亚群比例明显上调。在细胞毒实验中,以刺激活化的CD8+T淋巴细胞为效应细胞(E),以自体CD19+B细胞/肿瘤细胞为靶细胞(T)。在较高的E:T条件下(E:T=16:1),CXCR5+CD8+ T淋巴细胞和CXCR5-CD8+ T淋巴细胞介导的细胞毒效应强度没有明显差异。但是,在中低E:T条件下(E:T=4:1;E:T=1:1),前者表现出更强的细胞毒效应。可能是由于CXCR5+CD8+ T淋巴细胞能够与肿瘤细胞保持更加长久、稳定的相互作用,进而导致细胞毒分子能够高效传递。用特定的孔膜分别将CXCR5+CD8+ T细胞和CXCR5-CD8+T细胞与肿瘤细胞分离,再进行细胞毒实验,结果两者介导的细胞毒效应在任何E:T比均不再有显著差异,从而证实了CXCR5+CD8+ T与CXCR5-CD8+ T细胞相比,具有和DLBCL肿瘤细胞更长久、稳定的直接相互作用。细胞毒实验后,收集两组CD8+T细胞检测颗粒酶及穿孔素mRNA表达水平,收集上清用于检测颗粒酶及穿孔素蛋白表达水平。结果发现,CXCR5+CD8+T细胞的颗粒酶A、颗粒酶B和穿孔素的mRNA表达水平较CXCR5-CD8+ T淋巴显著升高,然而两者蛋白表达水平无显著差异;这提示CXCR5+CD8+T细胞激活时细胞毒因子表达上调更明显,但存在mRNA和蛋白表达的不一致。流式细胞术检测CD107a表达情况,两组细胞无显著差异,提示这种不一致不是脱颗粒状态导致,可能与肿瘤细胞介导的抑制有关。目前已知DLBCL瘤细胞分泌高水平的IL-10,可能改变肿瘤相关免疫的炎症状态。因此,选择阻断IL-10/IL-10R途径后发现,CXCR5+CD8+T淋巴细胞的颗粒酶、穿孔素mRNA和蛋白表达水平均显著升高;所有患者的相应肿瘤细胞存活率均有所下降,数据分析未达到统计学的显著性差异但非常接近。提示CXCR5+CD8+ T细胞对自体DLBCL的免疫作用易受IL-10的抑制,当抑制解除后细胞毒作用明显增强。综上所述:DLBCL患者中CXCR5+CD8+T淋巴细胞比例是明显上调的;与CXCR5-CD8+ T细胞相比,CXCR5+CD8+ T与自体肿瘤细胞接触和相互作用更紧密;CXCR5+CD8+ T细胞与自体肿瘤细胞作用时细胞毒颗粒的表达上调更显著;去除IL-10抑制可使CXCR5+CD8+ T细胞作用明显增强。总之,这些结果提示CXCR5+CD8+T淋巴细胞可以作为以CD8+T淋巴细胞为基础的DLBCL免疫治疗的潜在侯选细胞。