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研究背景足细胞损伤是多种肾脏疾病共有的病理生理变化,广泛存在于微小病变性肾病、局灶节段性肾小球硬化、IgA肾病等肾脏疾病中,遗传、机械、应激以及毒素在内的许多因素都可引起足细胞损伤,足细胞长期持续损伤会引起肾小球的减少,最终导致肾脏功能的减退。microRNA(miRNA)是一类对基因表达具有调节作用的小分子非编码RNA,通过诱导靶基因的转录后沉默,调控众多的生物学过程,miRNA在足细胞中发挥重要作用,是维持足细胞体内平衡所必需的,在肾脏的病理、生理过程中有重要的调控作用。本文拟研究过表达miR-199b-5p在足细胞损伤中的作用及基因表达谱特征,为足细胞损伤引起的肾脏疾病的诊疗提供理论依据。研究方法1.体外培养小鼠足细胞,用lipofectamine 2000分别在小鼠足细胞中瞬时转染miR-199b-5p 模拟物(miR-199b-5p mimics)、miR-199b-5p 过表达阴性对照(Negative Control,NC)组,用 qRT-PCR 检测 miR-199b-5p 在足细胞中表达水平;2.用流式细胞仪检测过表达miR-199b-5p足细胞凋亡的变化;3.运用高通量测序分析过表达miR-199b-5p足细胞中差异表达基因;4.采用DAVID数据库对miR-199b-5p靶基因进行基因功能Gene Ontology(GO)富集分析和信号通路(Pathway)富集分析。研究结果1.与NC组相比,转染miR-199b-5p mimics后,miR-199b-5p表达水平显著升高;2.流式细胞仪检测结果显示:对照NC组细胞凋亡率(32.97±1.45)%,转染mimics组细胞凋亡率(25.51±0.94)%较对照组下降(P<0.05);3.高通量测序发现,过表达miR-199b-5p足细胞中有106个基因表达较对照组降低大于1.5倍;4.基因功能富集分析结果显示miR-199b-5p靶基因可能通过NF-κB及TNF等信号通路,调控肌动蛋白骨架稳定性等多个方面抑制足细胞凋亡。研究结论过表达miR-199b-5p能抑制足细胞凋亡,可能通过多种信号通路调控靶基因的表达,在足细胞损伤的过程中发挥保护作用。