【摘 要】
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目的 本研究根据编码牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)主要毒力因子菌毛亚基-菌毛素fimA基因遗传多态性,采用16S rRNA聚合酶链反应(Polymerase Chain
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目的 本研究根据编码牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)主要毒力因子菌毛亚基-菌毛素fimA基因遗传多态性,采用16S rRNA聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测青春期龈炎患者和青春期牙周健康者龈下菌斑中的P.gingivalis,运用fimA引物特异性PCR对已检出的P.gingivalis阳性标本进行fimA基因分型,并对各型菌株进行超微结构观察,旨在探查各fimA基因型P.gingivalis在青春期龈炎患者和青春期牙周健康者中的分布,并根据观察的各fimA基因型P.gingivalis超微结构特点探讨其致病性差异的结构机制。 材料与方法 研究对象入选者97例,其中青春期龈炎患者51例,青春期牙周健康者46例。选取切牙和第一磨牙为菌斑取样部位。选取前期培养的脱脂牛奶保存的P.gingivalis临床野生菌株,作为拟观察超微结构的待检菌体。 常规酚-氯仿法提取龈下菌斑中全细菌及各菌体DNA。紫外分光光度仪测定DNA浓度。用P.gingivalis 16S rRNA和各fimA基因型特异引物进行PCR扩增,2.0%琼脂糖凝胶水平电泳检测扩增产物,在预期片段上出现条带为阳性,否则为阴性。对检出的各fimA基因型P.gingivalis制备超薄切片,在透射电镜下观察菌体表面结构特点。用SPSS11.5统计分析软件进行数据处理,x~2检验分析P.gingivalis在青春期龈炎组和青春期牙周健康组龈下菌斑中检出率的差异,Cochran Armitage趋势检验分析龈炎组和健康组P.gingivalis检出率随年龄变化的趋势,检验标准α=0.05。所有实验样本的测定均在盲法下进行,并随机抽取10%的样本做重复性实验,检
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