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长期以来,对性传播生殖器溃疡性疾病(GUD)病原体的实验室检测方法,一直采用直接涂片、分离培养及免疫学等传统方法。由于这些传统的方法费时费力、敏感性和准确性受多种客观因素的影响,达不到快速、准确诊断的目的,因此对于临床而言,建立一种快速且特异性强的病原微生物检测方法是必要的。基因扩增诊断方法是近年来飞速发展的一种分子生物学方法,自问世以来,以其为基础的病原体检测及诊断技术得到了快速发展。但上述方法一次仅检测单一基因,而在GUD中混和感染常见。如果需要同时检测多个基因,以上方法不太合适,因此,我们在上述研究工作的基础上,通过收集相关资料,测定靶基因核苷酸序列,设计和筛选了各病原体特异性引物探针的组合,摸索了多重PCR条件,建立了GUD基因芯片检测技术。该技术一次试验可以同时检测多种靶基因,具有特异性高,灵敏准确及快速高效的特点,并达到“一式多元”的目的。 第一章:各病原体特异性引物的设计、筛选及其靶基因的确定。 参考文献选择各病原体保守区基因,即单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型(HSV1和HSV2)DNA聚合酶基因、梅毒螺旋体47kD膜蛋白基因、沙眼衣原体主要外膜蛋白基因(omp1/ompb)及杜克雷嗜血杆菌16S rRNA基因,并于GenBank或DDJB或EMBL数据库下载其核苷酸序列。通过BLASTn查询进行了与其它微生物的同源性分析、比较,确定适合特异引物和相应探针设计的核苷酸区。ClustalX软件进行