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肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤,在恶性肿瘤相关死亡原因中排名第一,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80%-90%。近年来全球肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势,尤其在中国等经济发展中国家。Girdin是一种非受体型的鸟苷酸转换因子,调控三聚体GTP结合调节蛋白的GTP酶活性,参与了细胞的迁移、血管生成、和肿瘤的发展过程,之前的研究已经证实Girdin在多种肿瘤细胞中存在高表达,其中关于Girdin在肺癌中的作用的报道还比较少。目的:本研究旨在证实Girdin蛋白能够促进A549肺癌细胞趋向HGF迁移与侵袭,并深入研究其内在的分子机制。方法:(1)免疫组化探究MET与Girdin之间的联系;(2)生物信息学的方法找出MET在肺癌中的重要意义;(3)Western Blot鉴定HGF/MET下游的信号通路;(4)划痕实验与Transwell侵袭实验检测HGF以及HGF/MET通路抑制剂对细胞迁移侵袭作用的影响;(5)转染Girdin sh RNA降低Girdin蛋白的表达,Western Blot检测HGF/MET信号通路蛋白水平改变;(6)细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测Girdin表达降低对细胞的迁移和侵袭能力影响;(7)免疫荧光检测Girdin与MET在细胞内的定位;(8)免疫共沉淀实验检测MET与Girdin之间是否相互作用;(9)沉默细胞内源Girdin蛋白表达,比较过表达Girdin WT(野生型)和Girdin FA(突变型)对肺癌细胞HGF/MET信号通路及细胞行为的影响。结果:(1)免疫组化发现Girdin与MET在恶性肺癌组织里同时存在协同高表达;(2)通过大数据挖掘发现MET的表达水平在肺癌发生发展中具有重要意义,MET阳性率高的患者比MET阳性率低的患者死亡率明显增高;(3)HGF能刺激其受体MET的自磷酸化以及下游的Akt和ERK的磷酸化信号转导途径;(4)A549肺癌细胞具有趋向HGF迁移侵袭的趋势,而HGF/MET通路抑制剂对HGF引起的肺癌细胞迁移侵袭具有抑制作用;(5)Girdin表达降低后下游Akt磷酸化水平也会降低;(6)Girdin敲除后,A549肺癌细胞趋向HGF侵袭与迁移的能力减弱。(7)当用HGF刺激细胞时,Girdin会被MET磷酸化并发生结合,募集到细胞膜表面,介导下游的信号传导途径。(8)Girdin作为GEF发挥功能的关键位点为F1685A。结论:Girdin在肺癌恶化过程中介导了HGF的信号传导机制,并对肺癌细胞趋向HGF迁移和侵袭的能力有影响。