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本研究选择尖顶羊肚菌为材料，设计了两个途径来探索尖顶羊肚菌胞外多糖(MCEP)对人皮肤成纤维细胞(HSF)增殖和衰老的影响。本研究通过不同的方法制得两种尖顶羊肚菌多糖，一种是经过脱色、透析和微孔过滤的尖顶羊肚菌胞外多糖(MCEP—Ⅰ)，另一种则是未经脱色、透析和微孔过滤的尖顶羊肚菌胞外多糖(MCEP—Ⅱ)。本实验直接用62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml四个浓度的MCEP—Ⅰ继代培养HSF细胞，同时用50mg/kg·d、100mg/kg·d、200mg/kg·d三个剂量的MCEP—Ⅱ灌胃新西兰家兔制得的尖顶羊肚菌胞外多糖血清(MCEPS)来继代培养HSF细胞。通过对继代培养的HSF细胞形态变化、细胞密度、衰老相关β—半乳糖苷酶(SA-β—Gal)染色吸光值、羟脯氨酸的含量等指标的检测，综合评价尖顶羊肚菌胞外多糖对人皮肤成纤维细胞增殖和衰老的影响，为阐明羊肚菌多糖促进真皮组织再生、创面修复以及延缓衰老的功效提供重要的理论依据，为医疗、美容等领域新的抗衰老药物、护肤品、保健产品的开发奠定理论基础。
具体研究方法及结果如下：
1.本实验从液体深层发酵的发酵液中提取羊肚菌菌丝体胞外多糖。通过浓缩、离心、抽滤、脱蛋白等一系列工艺手段，得到MCEP—Ⅱ。通过进一步脱色、透析、醇沉、0.22μm微膜过滤，得到MCEP—Ⅰ。并测得MCEP—Ⅱ中多糖含量为47.52％，还原糖含量为13.90％，蛋白含量为1.37％；MCEP—Ⅰ中多糖含量为31.93％，还原糖含量为16.98％，蛋白含量为0.58％。与此同时，本研究还优化了多糖提取过程中脱蛋白的方法，并且在醇沉废弃液常温长期搁置中发现了一种新的结晶物的析出，通过紫外扫描发现，其在197.40nm和201.40nm分别有吸收峰，经测定其含还原糖27.70％，多糖62.07％，蛋白质0.06％，其理化特性和生物学活性有待进一步的研究和探索。
2.本实验直接用62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml四个浓度的MCEP—Ⅰ继代培养HSF。结果发现，浓度为125μg/ml的MCEP—Ⅰ在48h、72h、96h、120h时使HSF细胞密度分别增加了6.6％(P<0.05)、15.4％(P<0.01)、21.4％(P<0.01)和25.2％(P<0.01)。经过连续5次传代后，浓度为125pg/ml MCEP—Ⅰ使HSF的β—半乳糖苷酶染色吸光值降低了48.1％(P<0.01)，使HSF的羟脯氨酸含量增加了12.1％(P<0.01)。
3.本实验将用50mg/kg·d、100mg/kg·d、200mg/kg·d三个浓度的MCEP—Ⅱ灌胃新西兰家兔制备尖顶羊肚菌胞外多糖血清(MCEPS)来继代培养HSF细胞。结果发现，各浓度MCEP—Ⅱ灌胃家兔后制得的MCEPS培养HSF时，均不能明显促进细胞增殖(P>0.05)。经过连续5次传代后，各浓度MCEP—Ⅱ灌胃家兔后制得的MCEPS继代培养HSF细胞的β—半乳糖苷酶染色吸光值和细胞上清液中羟脯氨酸的含量，与正常血清对照组相比均无显著差异(P>0.05)。
结论：一定浓度的尖顶羊肚菌胞外多糖具有良好的促进人皮肤成纤维细胞增殖和延缓衰老的作用。