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本论文第一部分研究了人发角蛋白人工腱在体内的降解机制以及在诱导自体腱修复的过程中TGFβ1、2、3 mRNA的表达和泛素(ubiquitin)、层粘连蛋白(laminin)、血管内皮生长因子(VEGF)的产生,以阐明人工腱诱导自体腱形成的机理。结果表明在肌腱修复时,TGFβ1、2可能起主导作用,TGFβ3在肌腱修复过程中起协同作用。人工腱角蛋白的降解可能由泛素介导;人工腱周围新生组织中不正常蛋白的清除除有溶酶体参与外,也见泛素起作用。在处于人工腱降解期和自体腱形成期的新生的腱组织中,腱细胞含量丰富,功能活跃,VEGF的表达量较高;而在处于自体腱改建期的较成熟腱组织中,腱细胞的量明显减少,腱细胞的活动渐趋静止,VEGF基本不表达。自体腱形成期的新生腱组织中含有大量腱细胞,这个时期LN高水平表达;在较成熟和成熟的腱组织中腱细胞明显减少,LN的水平较低或无表达。LN主要由腱细胞分泌,术后6周可见炎症细胞和巨噬细胞也有LN表达。LN有利于细胞之间形成紧密连接,使胶原纤维集结成束,从而产生致密结缔组织促进肌腱再生。 第二部分探索用人发角蛋白套管修复大段缺损的胫神经。将兔的胫神经切除10mm后,将神经两断端塞入套管内,神经两断端相距10mm,用9—0尼龙线将神经外膜和人发角蛋白套管缝合。术后不同时间分别进行神经电生理检查、解剖和组织学观察。结果发现人发角蛋白套管可诱导神经纤维再生,跨过10mm的缺损间隙,从而修复胫神经。人发角蛋白是制作神经套管的较为理想的材料。HHK及其降解产物能诱导NGF和P75的产生,为神经再生创造良好的微环境;而缝线无此诱导作用。在新生神经组织中NGF和P75含量高,较成熟的神经组织中含量较少。切断神经可诱导LN水平升高。LN在神经组织中主要由雪旺细胞分泌,作为一种主要的细胞外基质,能为神经生长提供适当的“粘着性”,使轴突沿着基质桥生长,保持生长锥的稳定性,引导神经纤维定向生长。VEGF可能主要来源于神经外膜的成纤维细胞和神经组织中的雪旺细胞,除有血管发生的性能外还有促神经再生的功能。人发角蛋白及缝合线之间变性组织的异常蛋白的降解主要由泛素酶来实现。在新生神经组织中主要是泛素参与蛋白质和变性神经组织的降解,而在趋于成熟的神经组织中因降解的蛋白质量的减少,参与降解的泛素量也减少。 第三部分用CLONTECH公司生产的cDNA Array基因膜与总RNA逆转录得到的探针杂交,研究了人骨髓间充质干细胞与腱细胞的基因表达差异。在检测的 11 76种基因中,有 15种基因表达水平上调(这些基因是 AIM、HNGSI、DYAIL3、KJAA0151、BCAT、uroporphyringen Ill synthase、GAS、GDF、ZYX、JAKZ、CH]EUvi4、STATI、LIGI、MLFZ、VILZ),占127%,这些基因在功能上大都与细胞增殖和信号转导相关;1种基因队 吓调,这种基因与细胞之间的粘附有关。