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色谱是分离分析生物大分子类物质的最主要手段,而液相色谱填料是实现色谱分离的核心材料,因此具有重要的研究意义。本文主要研究以大孔硅胶为基质的分离生物大分子液相色谱填料,制备了键合型和聚合型两类色谱固定相,并对填料的色谱性能进行了考察。得到如下结果:
1.利用硅胶表面的键合反应制备了键合KH560色谱固定相,以三甲基氯硅烷为钝化试剂对键合填料进行封端处理,通过将KH560结构中的环氧结构水解为两个亲水性的醇羟基,制备了亲水性良好的二醇键合色谱填料。填料装柱后,通过蛋白质分离实验证明该固定相对生物大分子适应性良好,获得了较好的分离效果,柱子渗透性好,适合生物大分子的高效、快速分离。
2.制备了两种具有双键结构的键合固定相-键合KH570固定相和键合乙烯基固定相,并在此基础上利用聚合反应,以过氧化苯甲酰(BPO)为引发剂,对二乙烯基苯(DVB)为交联剂,甲基丙烯酸-2-羟基丙酯为聚合单体进行聚合反应,制备了硅胶基质聚合物的液相色谱固定相,优化了反应条件。蛋白质类生物大分子的分离实验证明:填料对生物大分子具有良好的亲和性和生物适应性,渗透性好,能实现快速、高效的分离,此外填料在碱性条件下表现出很强的耐受性。